超高效液相色谱-串联质谱法检测辣椒和肉酱中的苏丹红含量.docVIP

超高效液相色谱-串联质谱联用法检测辣椒和肉酱中苏丹红I-IV的含量 2014-5-16 超高效液相色谱-串联质谱联用法检测 辣椒和肉酱中的苏丹红I-IV的含量 李 静 (双汇集团462000) 摘要：建立了辣椒和肉酱中苏丹红I、II、III和IV含量的超高效液相色谱-串联质谱联用(UPLC-MS/MS)检测方法。样品经4%氨水乙腈提取后，经尼龙滤膜过滤，超高效液相色谱-串联质谱法检测。本方法苏丹红I、II、III定量限为1μg/kg，IV的定量限为5μg/kg，线性范围为1-50ng/mL；在苏丹红I-IV添加水平为10-50μg/kg时，辣椒样品中苏丹红I、II、III和IV的回收率分别为88%-104%、85%-104%、85%-118%和64%-75%，肉酱样品中苏丹红I、II、III和IV的回收率分别为105%-120%、77%-117%、84%-112%和62%-73%。 关键词：苏丹红；超高效液相色谱-串联质谱联用；辣椒；肉酱 苏丹红偶氮类常用于溶剂、汽油以及鞋、地板等的增色。苏丹红早在1995年就被确认为致癌物苏丹红、、也怀疑具有致癌性。中国和欧盟等全球多数国家都禁止用于食品生产但有不少食品生产企业为改善色泽、降低成本仍将其作为食用色素。目前，苏丹红的检测方法主要包括液相色谱法(HPLC)液相色谱-串联质谱联用法(LC-MS/MS)等，前处理方法主要包括中性氧化铝柱净化和GPC净化等方法。由于GPC净化比较费时，且产生大量废液；而中性氧化铝柱净化操作复杂实验条件要求苛刻结果重性差回收率不稳定。本文采用提取液直接稀释上样，结合UPLC-MS/MS的准确定性定量快速等优势，建立了一种应用UPLC-MS/MS法测定复杂基质辣椒和肉酱中苏丹红含量的定性定量分析和确证方法本方法操作简单，灵敏度高，检出限低，结果准确可靠。 1 材料与方法 1.1 主要仪器 Xevo TQ MS超高效液相色谱-串联质谱联用仪(美国Waters公司)；电子天平(瑞士Mettler Toledo公司)；VX-III型多管平行振荡器(北京Targin公司)；KQ-500DE型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；GL-21M型离心机(湖南湘仪离心机有限公司)；氮气发生器(英国PEAK公司). 1.2 试剂和材料 苏丹红I-IV标准品()；乙腈、甲酸(美国Fisher公司)；甲酸铵(美国Alfa Aesar公司)；氨水(天津科密欧)辣椒、肉酱(市售)。 1.3 标准溶液的配制 1.3.1 100μg/mL混合标准储备液 分别准确称取10.mg苏丹红IIV标准品于100mL容量瓶中，用丙酮定容，混匀，即为100μg/mL的苏丹红混合标准储备液，4℃冰箱中储存。 1.3.2 1.0μg/mL混合标准中间液 准确吸取1.00mL 100μg/mL混合标准储备液于100mL容量瓶中，用甲醇定容，混匀，即为1.0μg/mL的混合标准中间液，储存于4℃冰箱中。 1.3.3 混合标准系列 用4%氨水乙腈将苏丹红混合标准中间液稀释成1.0、2.0、5.0、10.0、20.0和50.0ng/mL的标准系列。 1.4 仪器条件 1.4.1 液相色谱条件 色谱柱：Waters BEH-C18 柱，2.1×50mm，粒径1.7μm；柱温：40℃；进样量：5μL；流动相：A：5mmol/L甲酸铵+0.1%甲酸水溶液，B：乙腈，洗脱梯度见表1所示。 表1 罗丹明B流动相的洗脱梯度 时间(min) 流速(mL/min) A(%) B(%) curve 0.0 0.45 30 70 / 2.0 0.45 0 100 线性变化 3.0 0.45 90 10 线性变化 4.0 0.45 30 70 即时变化 1.4.2 质谱条件 采用ESI+多反应监测(MRM)模式，电离电压3.0 kV，源温150℃，雾化气温度450℃，雾化气流量900L/h，锥孔气流量20L/h，碰撞气为高纯氩气，苏丹红I-IV的选择离子多反应监测条件见表2所示。 表2 MRM模式下苏丹红I-IV的监测条件 名称 定性离子对 定量离子对 采集时间（s） 锥孔电压(V) 碰撞能量(eV) 苏丹红I 249.25/156.22 249.25/156.22 0.161 20 20 249.25/232.25 13 苏丹红II 277.29/121.23 277.29/121.23 0.078 20 22 277.29/156.20 16 苏丹红III 353.29/156.20 353.29/156.20 0.078 34 20 353.29/196.15 22 苏丹红IV 381.32/106.22 381.32/106.22 0.161 30 24 38