塔斯品碱衍生物16FD的HPLC-FLD定量法方法学研究.pdfVIP

西北大学学报(自然科学版) 磊 2010年6月，第40卷专辑，J仰．，2010，v01．40，s．I． ·研究快报· Joumalof，帕f出w∞t Scjence 矽 U耐呦竹(№furalEd．i石伽) r JNwu 塔斯品碱衍生物16FD的HPLC．FLD 定量法方法学研究 吴迪，贺怀贞，王嗣岑 (西安交通大学医学院，陕西西安7l∞61) 摘要：目的建立简单快速的用HPLC．兀D法测定塔斯品碱荧光探针衍生物16FD浓度的方法。 方法 色谱柱为VP—ODS-C18柱，流动相为甲醇一水(60：40)，流速为l-0mL·Illin～，紫外检测波 长为326砌。结果 8)；日 方法 学考察结果表明，所建立方法简便、准确、重复性好，可用于塔斯品碱荧光探针16FD的浓度测定。 关键词：荧光探针；16FD；高效液相色谱法；荧光检测法 中图分类号：R917文献标识码：A 文章编号：1000-274X(2010)03旬171也 目前，肿瘤已成为威胁人类健康的重大疾病，因 此，对抗肿瘤药物的研究正日益受到科研人员的重 视。近年来，随着细胞分子学的发展，人们对肿瘤的 准品(实验室合成，纯度≥99．2％)；色谱纯甲醇 发生发展的认识日益深人。许多研究表明，在实体 肿瘤中存在表皮生长因子受体(EGFR)家族成员及制)；其他试剂均为分析纯。 其配体的高表达或异常表达【l_2J。由于EGFR在肿 瘤细胞生长、分化中的重要作用，因此成为目前肿瘤 2方法与结果 分子靶向治疗的重要靶点。本实验室在前期工作中 利用贺浪冲教授等创立的仿生生物亲和色谱细胞膜 2．1 16FD对照品溶液的配制 色谱H-．1(CMC)，筛选了秦巴山区特有的药用植物 红毛七中的活性成分，发现其中的塔斯品碱能够作 中，用DMSO溶解并稀释至刻度，摇匀，得16FD 用于EGFR，并能抑制EGFR的表达和细胞的增(10mg／mL)贮备液，置于4℃冰箱中保存，临用时 殖H‘6J。其后利用计算机辅助药物设计，对塔斯品 甲醇稀释至所需浓度。 碱的结构进行改造，合成了一系列对EGFR选择性2．2色谱条件流动相 更高的塔斯品碱衍生物【7】，16FD具有荧光特性。本 文建立了一种简单快速的16FDHPLC·nD定量测 定的方法。 2．3检测限、定量限的测定 取16FD对照品储备液用甲醇分别稀释为50， 1仪器与试剂 色谱条件下测定。经测定。取洲=3为检测限， 高效液相色谱一质谱联用仪系统(日本岛津公 S／Ⅳ=lO为定量限。 司，日本)，包括Lc．20AB三元混合梯度泵、DGu．2．4标准曲线的制备 取16FD对照品储备液用甲醇分别稀释为l， 20A3脱气机、SIL．20A自动进样器、CTo-20A柱温 收稿日期：2010躬．1l 作者简介：吴迪，女，云南昆明人，从事药物分析研究。 一172一 西北大学学报(自然科学版) 第40卷 750，500，300，100，50，10ng／mL的标准溶液，取5·的稳定性。 止进样，在上述色谱条件下测定，记录峰面积。以 峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标进行直线回 3结果与讨论 归，得到16FD的标准曲线方程。 2．5方法精密度 3．1检测限、定量限及线性范围 配制高、中、低不同浓度的16FD对照品溶液， 在2．2所述的色谱条件下16F