大黄鱼抗菌肽hepcidin在巴斯德毕赤酵母中的表达及其产物的抑菌活性.pdfVIP

第32卷第3期 应用海洋学学报 V01．32．No．3 2013年8月 JOurnaIOfApp|．edOceanOgraphy Aug．，2013 大黄鱼抗茵肽hepciCIin在巴斯德毕赤酵母中 的表达及其产物的抑菌活性 汪玉华，敖敬群，陈新华 (国家海洋局第三海洋研究所、海洋生物遗传资源重点实验室，福建厦门361005) 摘要：Hepci(1in是一类具有独特性质的小分子抗菌肽，克隆得到大黄鱼(风e“d∞c如小zcroceo)的矗印一 个氨基酸的信号肽、35个氨基酸的前导肽和26个氨基酸的成熟肽，成熟肽具有8个保守的半胱氨 酸．将Lyc一日印c 挑取4个克隆进行培养，提取酵母基因组进行PcR检测，结果表明目的基因片段已成功整合到酵 表达．体外抑菌实验表明重组Lyc—Hepc蛋白能够抑制2株水产养殖病害菌嗜水气单胞菌和副溶血 弧菌的生长．研究结果表明大黄鱼hepcidin可能在抗细菌免疫中发挥了作用． 关键词：海洋生物学；大黄鱼；hepcidin；酵母表达；抑菌活性 l DOI：10．3969／J．ISSN2013．03．01 中图分类号：P735 文献标识码：A 大黄鱼(风eudosc尬凡ocroceⅡ)是中国近海主要8个半胱氨酸，可形成4对二硫键，使其分子结构高 经济鱼类．近年来随着养殖规模的不断扩大及养 度紧缩Mo．研究表明，hepcidin具有广泛的抗细菌、 殖环境的恶化，病害问题日益严重，已成为制约大 病毒、真菌和原生动物活性。5． 黄鱼养殖业持续稳定发展的主要因素之一．鱼类 本实验事前期通过对poly(I：c)诱导大黄鱼脾 天然免疫系统相对发达，在抵御病原入侵中发挥 脏组织cDNA文库的EsT(expressedsequencetag) 了重要作用；1J．因此，开展大黄鱼天然免疫相关分 分析，发现了多条编码大黄鱼^epc施n的EsT序 子的特征及功能研究，不仅有助于加深对其非特 列6．已经报道，真鲷(Pn舯som∽，她加r)、鲈鱼 异性抗细菌免疫的认识，也可为大黄鱼病害防治 提供新的思路． Hepcidin是近年来新发现的一类具有独特性质 ^印c础n基因均存在多态性现象，这与人类及其他哺 的小分子抗菌肽．Krause等(2000)首次从人血液中乳类动物只存在一条或两条^印c砒n基因存在显著 分离纯化了这条多肽，并将其命名为肝脏表达的抗 不同，这种现象反映出鱼类在复杂的海洋环境下可 菌肽(LEAPl)。2．随后，Park等(2001)将从人尿分 能需要多条^epc施，z基因的不同剪切体来参与自身 离的这条多肽命名为hepcidin。3J，此后一直沿用此 的免疫防御反应。卜‘0o，也说明了hepcidin可能是鱼 名称．目前，从多种哺乳动物及鱼类中已成功克隆到 类普遍存在的重要免疫防御因子． ^epc池几基因．与其他抗菌肽不同，hepcidin在各物 种问具有较高的结构保守性，在成熟肽区域中富含 hepcidin的重组表达及其纯化一直有很大的难度． 收稿日期：2012一12一13 基金项目：同家海洋局海洋公益件行业科研专项经费资助项目(200905020旬3) 作者简介：汪乇华(1987～)．男，硕七研究生；E—majl：”yhwawj_87@163．(㈨l 通讯作者：陈新华，研究员；Emlail：chenxillll@t(M．¨ml 万方数据 ·384· 应用海洋学学报 32卷 由于原核表达系统不能对表达产物进行翻译后的折 质粒pMDl8-T-Lyc—Hepc．用＆oRI／Ⅳ0￡