针刺对慢性阻塞性肺疾病大鼠中枢神经肽Orexin的影响.pdfVIP

266 针炙经络研究回履与展望国际学术研讨全论文亲 针刺对慢性阻塞性肺疾病大鼠 i 中枢神经肽Orexn的影响 刘自兵1，胡玲1，周逸平1，汪克明1，耿文叶2，宋娜娜2， 李莉2，曹银祥2，朱大年2，沈霖霖2 (1．安徽中医学院针灸骨伤临床学院针灸经络研究所，安徽合肥230038； 2．复旦大学上海医学院生理及病理生理系，上海200032) I摘要I目的慢性阻塞性肺疾病(COPD)的气道通气受限与呼吸中枢兴奋性异常有关，下丘 脑合成的神经肽Orexin参与了对呼吸活动的中枢兴奋性调节。本实验探讨针刺改善肺通气效 应与Orexin的关系，为推广针刺治疗COPD提供科学依据。方法①大前门香烟对SD大鼠连 续12周烟熏制备COPD模型，每日两次，每次一小时，以肺病理学和通气功能评价模型。② 选大鼠肺俞和足三里穴进行双侧电针，每天30min，持续两周。③放射免疫方法检测大鼠下 mRNA及OrexinA的蛋白表达。结果(L)COPD模型大鼠经针刺治疗后，肺动态顺应性增加， 通气功能；其机制可能是通过下调神经肽orexin及其受体的表达。 ． I关键词l电针；足三里；肺俞；慢性阻塞性肺疾病；Orexin obstructive 慢性阻塞性肺疾病(chronic pulmonarydisease，COPD)是一种具有气流受限， 不完全可逆并呈进行性发展为特征的肺部疾病【l】。其病理涉及小气道和肺实质的慢性炎症， 造成小气道的纤维化导致管腔狭窄或阻塞以及肺气肿形成，通常可导致COPD患者肺通气功 能低下【21。近年来有资料显示肺通气功能下降与呼吸中枢的兴奋性异常有关【3-5】。Orexin(OX) 是1998年由德克萨斯大学Sakurai等【6J研究人员在大鼠的下丘脑发现了一类神经肽(OXA和 l and2 Rand OX2R)广泛分布于延髓和脊髓呼吸 OXB)，其受体(omxintype receptor,OXI 相关神经元上，NOrexinA对呼吸活动有调节作用【7】。针刺治疗COPD，改善肺通气功能、提 高患者的生活质量，近年来受到中外学者的重视【8—31，但其效应机制尚待阐明。因此本实验 利用COPD大鼠模型，观察电针对中枢OXA含量和其受体表达的影响，评价针刺效应与中枢 OX的关系。 1材料与方法 1．1 上海实验动物中心提供。适应性饲养一周后，将模型组大鼠置于自制的密闭烟熏箱中进行烟 熏(大前门牌香烟：上海卷烟厂；焦油13mg，烟碱1．2mg)。烟熏时间渐增至每次l小时， 每天两次(相当于1支／鼠)，连续12周。 1．2动物模型评价大鼠肺病理形态观察：取大鼠右肺，批多聚甲醛固定，常规石蜡包埋、 针灸经络研究回顾与展望国际学术研讨会论文集 267 切片、染色，在光镜下观察肺病理变化并摄片。肺通气功能测定：混合麻药(乌拉坦、a- 氯醛糖、硼砂)麻醉大鼠，气管插管，连接流速传感器及呼吸速度描记仪，以测呼吸流速(AV)、 潮气量(△VT)，用软管于食道插管，连接压力换能器以测食道内压(APel)。导入SMUP．PC 型生物信号微机处理系统(复旦大学医学院生理学与病理生理学系研制)，信号稳定后连续 C=AVT／APel(ml／mmHg)。 1．3放射免疫方法取大鼠下丘脑和延髓组织lOOmg，加生理盐水匀浆，置于含EDTA、 抑肽酶的离心管中，低温3500rpm离心10min后，取上清。蛋白层析方法：(1)酸化处理： lml血浆加lml C18层析柱(Phoenix公 (加入1％三氟乙酸，将乙腈配成60％浓度)lml过Sep．Pak200mg RIA缓冲液，待测。放免方法严格按照试剂盒(美国Phoenix公司)说 (7)重溶：加250肛1 明书(由专业人员)操作。主要步骤：标本和标准肽加入抗鼠OXA的兔血清中，4℃孵育24h， 加入RIA缓