17400鲨鱼软骨血管生成抑制因子的纯化与生物学活性研究.pdfVIP

广西师范大学学报(自然科学版) 2003年10月 0FGUANGXINORMAL JOURNAL UNIVERSITY 17 400鲨鱼软骨血管生成抑制因子的纯化 及生物学活性研究 曾 锋”，杨伟兴1，崔昆燕2，刘威1，张展霞1，余健秀3，庞义3 (1中山大学化学与化学工程学院，广东广州510275；2中山大学测试中心，广东广州510275 3巾山大学生命科学学院，广东广州510275) 由于软骨血管生成抑制因子来源于动物组织，无明显的毒副作用，显示了良好的临床应用前景．鲨鱼 属于软骨鱼纲，内部骨骼全部由软骨构成，软骨含量丰富．在前文基础上，本文以广东阳江鲨鱼软骨为原 料，分离纯化获得另一种新的鲨鱼软骨血管形成抑制因子SCAI—C，详细研究了其生物学活性特征． 1实验部分 1．1试剂与仪器 鲨鱼软骨(广东阳江)；盐酸胍，2一N一吗啡啉乙磺酸(MES)，三氟乙酸；Sephadex 8000230型超滤系统、PI。TK超滤膜(3000D)及PI，BC超滤膜(300 C。反相柱(10mm×250 型高效液相色谱系统；Juptier 机． 1．2实验方法 000 1．2．1 SCAI的分离纯化200g鲨鱼软骨在1 ml。含0．02 000 1．0mol／I，盐酸胍溶液中，28。C下振荡48h．于4。C下离心，弃残渣；继续在4。C以12r／min离心； 000(300000的鲨鱼软骨粗提液，蛋白质含量为1700 上清液超滤获取分子量在3 mg／I。． mol／L 鲨鱼软骨粗提液透析；丙酮分级沉淀，蛋白质溶解于0．02 mol／I，NaCI，0．1％(w／vCaCl2和0．02％(w／V)NaN3的005mol／I。TrisHCI缓 层析，pH7．6含0．2 nm；收集A，B组份，浓缩，透析．B组含17400Da，15000Da和12600Da三种 冲溶液洗脱，检测波长280 蛋白质，具有显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的活性特征． cm×25 C。柱(1．0 B组份于Juptier 相，检测波长^一280nm．分别收集a，c组分，透析，干燥，获得SCAIa和SCAI—C． 1．2．2蛋白含量测定按Bradford方法，以牛血清白蛋白为标准样品． 1．2．3SCAI纯度鉴定及分子量测定SDS 1 2 4 SCAI抑制鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成试验将受精鸡蛋放入温度为378。(：、湿度为60％ 的孵化箱中，4d后在鸡蛋气室端钻约1．o～2．0 o(1711 cnl×1．5 处用小砂轮磨切开窗(o．5 cm)，切破壳膜，暴露出绒毛尿囊膜；加入一定量的蛋白质溶液；用灭 d，2 菌透明胶带封窗后，放人孵化箱；孵化1 d和3d后揭除透明胶带取膜制作标本． 作者简介：曾 ZSUedu．cn． 广西师范大学学报(自然科学版) 第21卷 2结果与讨论 2．1 SCAI—c纯度及分子量 SCAIc，提取率为0．004‰．SDSPAGE电泳银染显示SCAIc为一条带，根据蛋白质的相对迁移率 400Da． 计算，S