实验性帕金森病影像学的研究.pdfVIP

白质转导采用的不是典型的内吞机制。另外，阻止ATP产生的药物(叠氮钠和鱼藤酮)也不能 抑制TAT2(48—60)衍生肽的转导作用，这说明蛋白质转导是非ATP依赖的。用PTD碱性多 肽处理细胞也没有发现细胞内的酶(如乳酸脱氢酶)的外漏，这说明PTD可能不是通过膜通道 进入细胞的。 于是人们猜测蛋白质转导可能通过PTD与细胞表面通过静电相互作用直接实现的。Ho 蛋白质转导效率比TAT2(47。57)高32倍，PTD24在二级结构上是双亲结构，亲水部分可能 有利于Arg上带正电的胍基与细胞表面结合，而疏水部分可能更加有利于穿透细胞膜。PTD24 对细胞转导能力的提高可能说明了，有效的蛋白质转导并非是简单的静电相互作用模式。 穿膜肽转导技术在活体内外传递广泛地大分子和小型微粒显示出极大的前景。各种CPPs 已被成功地用于高分子量药物和纳米微粒的药物载体的细胞内传递，同样能促进疫苗的发展 和分子显像研究领域。在后基因组时代，由于上文提到的PTD特点，以穿膜肽位载体的物质转 导技术已经在基础研究和应用研究中显示出明显的优势，PTD绕过了核酸的参与，能够携带外 源的大分子物质进入细胞，穿过血脑屏障，为包括AIDS、癌症、脑科学的分子显像及治疗研 究提供了新的工具。 实验性帕金森病影像学研究 中南大学湘雅三医院王维于小平毛俊石桥容鹏飞 刘晟 PD是累及多巴胺神经元的神经系统退行性疾病，常见于老年人，主要症状为运动减少、 强直、震颤。目前多为症状性诊断，有较大的误诊率。在症状出现之前常规检查难以诊断。 影像学方法可反复进行检查，具有较高价值，本课题的研究目的是对比不同影像学检查方法 在PD诊断方面的价值。探索猪多巴胺能神经元脑内移植对帕金森猴的治疗作用 材料与方法 一、制作偏侧PD模型 健康老年雄性恒河猴10只，经股动脉插管至右侧颈内动脉，注射制模药物(1．甲基4苯 基-1，2，3，6-四氢吡啶，M哪)。行为观察：在术前、术后以录象的方式记录动物行为；术后进 行阿朴吗啡试验，肌注阿朴吗啡后记录动物行为。4只动物模型作影像诊断研究，6只动物用 作治疗研究。 (一)影像学检查 I．CT扫描：实验动物分别在术前、术后1个月、术后3个月进行头颅横轴位CT平扫， 基线为0M线，层厚5mill，层距5rnmo 2．MRI：实验动物分别在术前、术后1个月、术后3个月进行头颅横断面及冠状面MRI 平扫，SE序列：600msll5msfrlw)，2500 rns／90ms(TzW)，基线平行或垂直OM线，层厚4 mill，层距5mill。 动物分别在术前、术后20．22天行SPECTDAT显像扫描(显像剂：咖Tc．TRODAT-I)j阳rCBF c．ECD)。 显像(显像剂：9嘲T 4．PET葡萄糖代谢显像：健康猴：1只，作为正常对照；PD猴：3只，1只于术后第9 天，其余2只于术后第2个月PET葡萄糖代谢显像扫描(显像剂：18F-FDG)o (二)神经病理检查 取黑质行酪氨酸羟化酶(17-1)免疫组化染色，比较两侧黑质多巴胺神经元(TH染色阳 性)的数目，判断术侧有无多巴胺神经元受损。 18 6天孕猪(由湘雅医学院动物实验学部提供)， 1．胎猪多巴胺能神经元的获取：孕龄14。1 无菌条件下打开取出子宫，分离胎猪。D-Hank’S清洗胎猪后，剥离颅骨骨膜及血管组织， 将组织浸泡在冷D-Hank’S，分离出脑干，置于冷培养基中。取A8、A9(黑质)、A10(腹侧 InIn×10mm×0．75 被盖区)区组织约1姗3(15 mm)；剪碎组织块，加入0．125％胰酶+0．I％EDTA(以 min后用加入含12％FBS的DMEM／F12的培养基，终止消 无血清培养基稀释)10cC下消化；15 化，吸管轻轻吹打，制成细胞悬液。接种：将细胞悬液事先配制的培养基稀释，接种于置有 h 事先包被好的盖玻片的6孔板／培养瓶内，每孔约1ml