红花黄酮醇合酶基因的全长cDNA克隆及植物表达载体的构建.pdfVIP

2015年2月I第40卷第4期 恩曼蒌 盎 Vo1．40，No．4lFebruary，2015 红花黄酮醇合酶基因的全长 cDNA克隆及 植物表达载体的构建 杨文婷 ，刘秀明 ，万秋 ，姚娜 ，王南 ，张雪萌 ，焦重 ，李海燕，李校垄 (1．吉林农业大学 生物反应器与药物开发教育部工程研究中心，吉林 长春 130118； 2．吉林农业大学 生命科学学院，吉林 长春 130118) [摘要] 黄酮醇合酶(flavonolsynthase，FLS)是黄酮化合物代谢途径中的关键酶之一。本文在红花转录组测序结果中获得中 间序列的基础上，采用 RT—PCR和RACE技术，从我国传统中药材红花花瓣中克隆到黄酮醇合酶基因的全长cDNA。该基因全 长 1201bp，开放阅读框 1叭1bp，编码 336个氨基酸。系统进化分析表明，红花FLS基因编码氨基酸与同属菊科植物氨基酸 具有一定的同源性 ，其中与金光菊的亲缘关系最近。通过分子生物学方法，成功构建pBASTA—FLS植物表达载体。为后续研 究该基因的生物功能及黄酮化合物合成机制奠定了基础。 [关键词] 红花；黄酮醇合酶；RACE克隆；生物信息学分析；植物表达载体 Full-length cDNA cloningofflavonolsynthasegenesofCarthamus tinctoriusand constructionplantexpressionvector YANGWen—ting ，L1UXiuming ，WANQiu，YAONa，WANGNan，ZHANGXue—meng2 JIAO Zhong—da ，LIHal—yan， ．LIXiao—kun’ (1．EngineeringResearchCenterofBioreactorandPharmaceuticalDevelopmentunderMinistryof Education，JilinAgriculturalUniversity，Changchun130118，China； 2．CollegeofLifeSciences，JilinAgriculturalUniversity，Changchun130118，China) [Abstract] Flavonolsynthase(FLS)isoneofthekeyenzymesinflavonoidsmetabolicpathways．Inthisstudy，middlesequence wasobtainedfrom Carthamustinctoriustranseriptomesequencingresults．Full—lengthcDNAsofFLSwasclonedrfom petalsofC．tint— toriustoFLSbyusingRT—PCRandRACEtechnology．Itsfull—lengthcDNAwas1201bp，withanopenreadingflameof1101bpand 336encodedaminoacids．Thephylogeneticanalysisshowedthat，FLSgeneencodedaminoacidsinC．tinctoriuswerehighlyhomolo— gouswithaminoacidsincongenericCompositaespecies，especiallyRudbeckialaciniata．ThepBASTA—FLSplantexpressionvectorwas successfullybuihbythemolecularbiologymethod，whichlaysa~undationforfurtherstudyingbiologyfunctionsofthegencandbio— synthesismechanism offlavonoids． [Keywords] Carthamt~stinctorius；flavonolsynthasegene；RACEcloning；bioinfon