组蛋白去乙酰化酶8对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响.pdfVIP

堕生 医堂2014年 9月(第5卷第3期) OralBiomedicine，Vo1．5，No．3，Sep．2014 · 113 · [文章编号】 16748·603(2014)03—0113-05 · 论 著 · 组蛋 白去乙酰化酶 8对大鼠骨髓间充质 干细胞成骨分化的影响 周 华 ，傅 瑜 ，戈 杰 ，周培培 ，江宏兵 (1．南京医科大学口腔疾病研究江苏省重点实验室，江苏 南京 210029；2．南京医科大学附属 口腔医院 口腔颌面外科 ，江苏 南京 210029，江苏 南京 210029) [摘要] 目的：探讨组蛋白去乙酰化酶 8(histonedeacetylase8，HDAC8)对大 鼠骨髓 间充质干细胞 (bonemarrowmesenchymal stemcells，BMSCs)成骨分化 的影响。方法 ：通过全骨髓贴壁法体外分离培养大 鼠BMSCs，转染 HDAC8过表达慢病毒载体 ，并 于矿化诱导液中培养7d后 ，实时荧光定量 PCR、Westernblot检测 BMSCs成骨分化能力的变化 ；矿化诱导 14d后 ，茜素红钙结 节染色检测 BMSCs矿化能力的变化。组蛋 白去 乙酰化酶抑制剂—— 曲古抑菌素 A(trichostatinA，TSA)刺激转染 HDAC8过表 达慢病毒载体 的BMSCs，于矿化诱导液 中培养 7d后 ，实时荧光定量 PCR及 Westernblot检测 TSA刺激前后过表达 HDAC8的 BMSCs成骨分化能力的变化 。结果：HDAC8过表达组经矿化诱导 7d后 ，成骨分化相关基因mRNA、蛋 白表达水平均低于空 白对照组一；经 14d矿化诱导后 ，HDAC8过表达组茜素红钙结节 的着色程度及范围低于空 白对照组 。TSA刺激 的HDAC8过表 达组矿化诱导 7d后 ，成骨分化相关基 因mRNA及蛋 白的表达均高于未加刺激组 (P0．05)。结论 ：HDAC8对大 鼠BMSCs成 骨分化具有抑制作用 。 [关键词] 组蛋 白去 乙酰化酶8；组蛋 白去 乙酰化酶抑制剂 ；曲古抑菌素 A；骨髓 间充质干细胞 ；成骨分化 ；大 鼠 [中图分类号] R780．2 [文献标识码] A [doi] 10．3969／j．issn．1674—8603，2014．03．001 Effectofhistonedeacetylase8on osteoblastdifferentiationofratbonemarrow mesenchymaistem cells ZHOU Hua| ， FU Yu ，GE Jie ，ZHOU Peipeii ， J1ANGHongbing ． 1．JiangsuKeyLaboratoryofOralDiseases，Nanjing MedicalUniversity，Na ng210029，China；2．DepartmentofOralandMaxillofacialSurgery，AffiliatedHospitalofStomatology， Na ngMedicalUniversity，Na ng210029，China) Correspondingauthor：JIANGHongbing，Email：jh6@咖 ¨．edu．cn，Tel：0086—25 [Abstract] Objective：Toevaluatetheeffectofhistonedeacetylase8(HDAC8)onosteoblastdifferentiationofratbonemarrowmes— enchymalstem cells(BMSCs)．Methods：RatBMSCswereisolatedandculturedbythemethodofwholebonemarrow adherentand transfectedwithHDAC8overexpressionlentiviralvector．Real—timePCR，W esternblotwereappliedtoestimatethechangeofosteogen— iccapacityafter7daysofo