热敏高分子修饰的铁钛菁作为辣根过氧化物酶模拟酶地研究.pdfVIP

1 l—02 热敏高分子修饰的铁酞菁作为辣根 过氧化物酶模拟酶的研究 朱庆枝，杨黄浩，陈秋影，李东辉，许金钩 (厦门大学化学系．福建厦门361005) 攘薹：合成了带活性末端的热敏高分子并用其修饰四磺基铁酞菁．研究了修饰后的铁取菁模拟过 氧化物蔫的催化括性．结果表明，修饰后铁酞菁的模拟酶活性明显高于游离铁酞菁． 关t词：热敏i奄分子；四磺基铁酞菁；模拟过氧化钫酶 中圈分类号：0f蛳／．3 文棘标识码：A 辣根过氧化物酶fHRP)是生化分析中常用的酶之一．以前模拟HRP酶的研究主要集中 在卟琳类化合物““1，最近发现一些水溶性金属酞菁类化合物具有类似HRP的催化活 性，可以作为HRP良好的模拟酶”’．已有结果表明，对模拟酶进行合理的修饰可12上显著 地提高模拟酶的活力．聚N一异丙基丙烯酰胺(PNIP)是一种温度敏感高分子，具有独特的相 转变温度，已被广泛应用于生化研究．本实验合成了一种末端带活性羧基的寡聚N一异丙基 丙烯酰胺(oNiP)，并以其修饰四磺酸基铁酞菁，考察了ONIP-铁酞菁的催化活性． 1紫外一可见吸收光谱 nm和632 游离铁酞菁有2个吸收带，分别位于329 llm，当铁酞菁和ONIP结合后， 11／11． 329 nm的吸收峰则红移至691 nm的吸收峰没有变化，丽632 2高分子修饰的铁酞菁催化反应条件 性。而反应产物则在vH=10左右荧光最强．游离铁酞菁的最佳催化反应以及荧光测定酸度 和HRP类似．对于高分子修饰的铁酞菁，其催化反应的最适pH值范围是9～11。和催化 反应终产物产生最强荧光所需pH值～致，实验选择oH；10．8进行催化反应和荧光测定． 在此基础上还考察了不同缓冲体系对反应的影响，结果表明，在NHrNHIa和 强度．本实验选择Na2C03-NaHCO，缓冲体系来控制反应的酸度． rain后。体系的荧光强 考察了反应时间和试剂浓度的i蓼响，结果表明，室温下反应25 mmol／L时， 度达到最大值且恒定。本实验选择室温下反应30rain．p-HPPA在O．2～1．0 mmol／L． 体系的荧光强度最大且稳定。本实验选择0．5 1艴藩日期：t999--06-17 east简介：朱庚柱(1969一)，男，讲师，博士． 基金项目：福建省自然科学基金资助项目(B9810004)；国家教育部博士点基金资助项目 ·112· 福州大学学报(自然科学版) 第27卷 3米氏常数(K。)和转化率(瓦t) mmol／L以及系列浓度的 选择模拟酶和H202浓度分别为0．5／』mol／L和0．I p_HPPA进行米氏常数和转化率的测定．高分子修饰的铁酞菁模拟酶的j‘和墨．。分别为 o．23mmol／L和2_8 s-1)，修饰后 s一，和游离铁酞菁相比(j气为o22mmol／L，^k=I．3 的铁酞菁的催化能力增加约1倍． 4模拟酶和过氧化氢的测定 在最佳反应条件下，选择p-HPPA和H202的浓度分别为0．5、0．2mmol／L。制作模 nmol范围内，体系的相对荧光强度与 拟酶的工作曲线．结果表明，当模拟酶浓度在3～40 模拟酶的浓度成良好的线性关系．检测限(3a／s)为1．7nmol／L，相关系数为o．9986．平行 5次测定30 的浓度分别为500