多级亲与过滤分离纯化溶菌酶研究.pdfVIP

多级亲和过滤分离纯化溶菌酶研究+ 何利中白妹孙彦 (天津大学化工学院生物化工系 天津300072) 关键词亲和过滤多级溶苗酶纯化 1前言 具有高度选择性的生物分离技术在生物产品的下游加工过程中占有重要地位。亲和分离技术 由于其高选择性而日益受到关注。除运用最为广泛的亲和层析外，亲和沉淀、亲和分配、亲和膜 色谱以及亲和过滤等亲和分离技术亦得到人们的普遍重视。其中，亲和过滤是亲和作用原理与膜 分离技术相耦合的一种新型亲和分离技术．既具有亲和层析选择性好的优点，又具有膜分离法易 于放大的优势。亲和过滤法的不足之处在于，其传统操作方式均为单级操作。难以同时获得较高 的收率和纯度。为克服单级亲和过滤所存在的缺点，孙彦等提出多级亲和过滤过程的概念。理论 计算表明。在使用等量载体的情抚下，与单级过程相比，多级过程能有效地提高目标蛋白的收率 和纯度““。 。 本文将活性染料辛巴蓝修饰副TSK凝胶上以得到亲和过滤载体，利用多级亲和过滤从鸡蛋清 中分离得到溶菌酶，结果表明多级亲和过滤是分离蛋白的一种有效的方法。 2材料与方法 2．1．实验材料 Soda公 M M，B 缓冲液：o．01 M。 缓冲液所含NaCl浓度为2．0 ； 2．2蓝色TSK的制备． ， u O．7 10 ml。将锥形瓶置于摇床上， 锥形瓶中，加入CB g，NaCIg。补充水至混合液总体积为135 450C下恒温。振荡40min后，加入15ml nm下测吸光度。 制蓝色TSK凝胶用Atkinson所述系列溶液清洗删．清洗液收集定容后在620 2．3．蓝色凝胶对溶菌酶的吸附．脱附实验 ml溶菌酶溶液(用A 准确称取0．3 ml锥形瓶中，加入20 g(湿重)左右蓝色凝胶置于50 缓冲液配制，蛋白浓度在0．2～2mg／ml之间)。将锥形瓶置摇床上，25C下振荡20h，静置，取 nll，280 上清液5 nm下测吸光度。 mol／L的缓冲液5ml，使溶液盐浓度增 向平衡浓度已测的锥形瓶中加入NaCl浓度为3．85 至lmol／L。锥形瓶继续置摇床上振荡，20h后测上清液吸光度。 ‘国家自然科学基金及天津市自然科学基金资助项目。 帕8 2．4蛋清溶液制备 min。离心，弃去不溶物。 将新鲜蛋清用A缓冲液稀释3倍，稀释液置冰水浴中轻微搅拌30 上清液用A缓冲液稀释至蛋白总浓度为1．5mg／ml。 2．5溶菌酶的纯化 pm的不锈钢滤头，而凝 多级亲和过滤实验装置如图l所示。蛋白分子能自由透过孔径为1 ml。 胶颗粒则被滤头完全截留。在每一全混池中放入蓝色TSK凝胶lg(湿重)，加入A缓冲液50 调节进口和出口流量相等以使各池内溶液体积恒定。在吸附阶段，蛋清溶液以2ml／min的流速 min后，将蛋清溶