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微生物毕杂占1999年9月第19卷第3期JOURNALOFMICROBIOLOGY
s哪．1999Vd．19№．3
·研究简报·
多瘤病毒分离株的研究。
赵宜为 赵晓琰
(H生部兰州生物制品研究所730046)
多瘤病毒注入新生小鼠体内后，可刺激小鼠 每1Inl细胞培养液加入100∞的[”s]～甲
组织细胞分裂繁殖、产生多种肿瘤。用肿瘤药物 硫氨酸，(500～1
000Ci／mm01)。标记2h。
治疗后，从缩小的肿瘤块组织细胞中分离的多瘤 1．6 RNA的提取与棱酸杂交
病毒株有的已经不再能诱发肿瘤。本文研究了这 胞浆内RNA的提取按Favalom的方法
种不能产生肿瘤的多瘤病毒株和野生型病毒株在
分子遗传学上的区别。 1969)oJ。胞浆RNA杂交的探针来源于质粒
pMr(GrummtI，1981)。细胞核RNA杂交撵针
1材料与方法
et
来源于日内瓦大学(weila1．)。探针标记采用
5一氟胞嘧啶(5一Fc)购于美国SIGMA公 000
G／nmd)。杂交用的细胞采用醋酸纤维素膜片法
司，[3H]一胸腺嘧啶、[35s]一甲硫氯酸购于英国
黜d础eIIicalCentre 培养。
Amemharn。免抗鼠多瘸病毒
A盯免疫荧光试剂购于法国巴斯德研究所。
2结果
1．1分膏多瘤病毒的方法
小鼠为Nm小鼠，新生小鼠皮下接种或腹腔 2．1【3H]胸腺嚏啶渗入试验和免疫荧光试验
内接种多瘤病毒悬液。有肿瘤生长的小鼠在18 [3H]试验结果表明野生株多瘤病毒诱导细
～229后用5一氟胞嘧啶(5一Fc)治疗，300ms／
胞进行分裂繁殖的能力强，分寓株诱导细胞繁殖
l【g．每天1次，腹腔内注射，共10d。选择瘤体明 的能力低、时间长。免疫荧光试验结果表明野生
显变小的肿瘤块。匀浆后收集肿瘤细胞及瘤体内 株感染的细胞数量比分离株感染的细胞数量高得
浸润细胞。细胞裂解后收集含有多瘤病毒的悬液 多。在16h，野生株感染的细胞比例是分离株的
进行细胞感染试验，选择突变株。 10倍多。
1．2细胞培养及I青毒■染试验 2．2病毒RNA的合成
新生地鼠肾原代细胞培养。野生型多瘤病毒 病毒RNA合成的数量是通过核酸杂交试验
感染用109pfu／nll病毒悬液0．4rnl加入细胞培养
的结果衡量的。与胞浆RNA杂交的探针，含有
瓶内，细胞感染剂量10～50pfu／llll。5％032。 S
多瘤病毒45pm—rRNA的外转录间隔子(“．
(37±0．5)℃条件下用00l孵育箱培养。病毒吸
ternaltranscribed
spacer)。与细胞核RN
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