应用AFLP分析国内7个警用犬种的遗传多样性.pdfVIP

应用AFLP分析国内7个警用 犬种的遗传多样性 马长书1叶俊华1杨前勇’马巍2杨利国2 摘要：本文研究中实验警犬共221只，其中德国牧羊犬40只、罗威纳犬31只、拉布 拉多犬30只、史宾格犬21只、马里努阿犬45只、昆明犬35只、杜伯文犬19只。分别 组合得到特异性标记，特异性标记总数75个。21个引物组合共扩增出清晰的标记5081条， 平均每个引物组合34．57条／犬，并按UPGMA法对7个警用犬种进行聚类。结果表明，应 用AFLP方法可很好地揭示我国现有警用犬种的遗传差异。 关键词：AFLP警犬遗传多样性 分析 自从我国公安机关、边防、消防及武警部队配备警犬以来，先后引进了德国牧羊犬、 罗威纳犬、拉布拉多犬、史宾格犬、马里努阿犬、杜伯文犬6个品种，加上我国自有的昆 明犬，主要配发犬种即这7种。我国现有警犬品种基本来自国外进口，种犬数量有限。在 国内进行一段时间的繁育后，易形成近亲繁殖的状况，导致品种退化；另一方面，选择警 用性状、繁殖性状优良的种犬建立繁育核心群，提供量足、质优的作业受训犬的任务十分 紧迫。因此，开展犬遗传多样性研究，促进优良性状个体的快速选育对于加快我国警犬事 业的发展意义重大。以前，曾有应用RAPD…和微卫星心’技术研究犬遗传多样性的报道，AFLP 分子标记技术兼有RFLP的可靠性和RAPD的简便灵敏性，且不需知道基因组序列，标记覆 盖整个基因组，现已广泛用于构建基因组和片段的高密度遗传图谱口’。本实验首次应用 AFLP方法分析7个警用犬种的遗传多样性，并对7个警用犬种进行聚类分析，探讨品种的 进化、分类，寻找品种的特异性标记，为今后警犬繁育工作中的品种保纯和品种改良提供 理论依据。 1．材料与方法 1．1实验设计 分别构建德国牧羊犬(German shepherd malinois)、 犬(Labradorretriever)、史宾格犬(Englishspring)、马里努阿犬(Belgian 昆明犬(Kunmingdog)和杜伯文犬(Doberman 犬的池DNA进行分析。AFLP扩增产物采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。 327 1．2试验动物与样本采集 1．2．1样本来源 样本为七个警用犬种的血样，共221只，其中德国牧羊犬40只、罗威纳犬31只，采 自公安部南昌警犬基地；拉布拉多犬30只、史宾格犬21只，采自公安部南京警犬研究所： 马里努阿犬45只、昆明犬35只，采自公安部昆明警犬基地：杜伯文犬19只，采自公安 部沈阳警犬基地。 1．2．2采样方法 首先用70％的乙醇对警犬的前肢静脉进行消毒，用真空采血管采血3～5ml(ACD抗凝)， 用冰盒带回实验室一20。C保存备用。采血时不可剪毛，以免影响警犬的体形外貌。 1．3样本DNA提取 采用酚一份抽提取法，DNA溶液保存于-70℃。 1．4池DNA构建及模板DNA稀释 从40只德国牧羊犬血样DNA提取液中等量地：玟出一定量的DNA溶液，混合在另一干 净的1．5ml离心管中，构建德国牧羊犬池DNA，加入一定量的灭菌超纯水稀释至终浓度为 30ng／uL。同样的方法将罗威纳犬、拉布拉多犬、史宾格犬、马里努阿犬、昆明犬、杜伯 文犬的血样DNA分别构建成池DNA并按上述浓度稀释。 1．5AFLP方法 1．5．1酶切与连接 (1)第一步酶切(总体积20uL) ddH20 L乱nJ buffer 10×1igase 2．OuL 10mg／mlBSA 0． 2UT●L l I 5 OO／uLEcoR O