斜纹夜蛾普通气味结合蛋白ⅠcDNA 的克隆及在原核细胞中的表达.pdfVIP

中国农业科学 2009,42(3):891-899 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.03.017 斜纹夜蛾普通气味结合蛋白ⅠcDNA的克隆 及在原核细胞中的表达 金丰良，董小林，许小霞，任顺祥 （华南农业大学资源环境学院昆虫学系/教育部生物防治工程中心，广州 510642 ） 摘要：【目的】克隆、序列分析和原核表达编码斜纹夜蛾（ Spodoptera litura ）GOBPⅠ（SlGOBPⅠ）的cDNA。 【方法】采用同源克隆结合RACE的方法克隆SlGOBPⅠ基因的cDNA序列，并在 pET-32a/BL21（DE3）系统中进行 原核表达。【结果】从斜纹夜蛾触角中克隆了 GOBPⅠ的 cDNA 序列（GenBank 登录号为 EU086372），序列分析表 明，SlGOBPⅠ开放阅读框序列为495 bp，编码164个氨基酸，分子量为19.3 kD，等电点为5.54。SlGOBPⅠ具有 昆虫气味结合蛋白的典型特征，即氨基酸序列中具有 6个半胱氨酸残基，呈酸性。SlGOBPⅠ氨基酸序列与鳞翅目 昆虫的气味结合蛋白氨基酸序列具有较高的相似性，表明 SlGOBPⅠ属于 GOBP 家族。将 SlGOBPⅠ编码序列，克隆 到表达载体 pET-32 a 上，构建原核表达载体 pET-SlGOBPⅠ，在表达宿主菌 BL21（DE3）中，经 IPTG 诱导成功表 达了相对分子质量为32.0 kD的可溶性融合蛋白，利用Ni2+-NTA亲和柱一步纯化了SlGOBPⅠ融合蛋白，以此融合 蛋白免疫新西兰大白兔制备了 SlGOBPⅠ的抗血清，ELISA 滴度为 1 ﹕5 000，Western 印迹检测结果显示，SlGOBPⅠ 抗血清与表达的融合蛋白质呈阳性反应，表明所表达的融合蛋白保持原有的免疫原性。【结论】克隆、分析和表 达了编码斜纹夜蛾气味结合蛋白 GOBPⅠcDNA 序列，为今后深入研究斜纹夜蛾 GOBPⅠ基因的结构和功能奠定了基 础。 关键词：斜纹夜蛾；触角；气味结合蛋白；基因克隆；原核表达 Cloning and Prokaryotic Expression of cDNA Encoding General Odorant Binding Protein Ⅰfrom Spodoptera litura JIN Feng-liang, DONG Xiao-lin, XU Xiao-xia, REN Shun-xiang (College of Natural Resources and Environments, South China Agricultural University/Engineering Research Centre of Biological Control, Ministry of Education, Guangzhou 510642) Abstract: 【Objective 】 The objective of this study aims at cloning, sequence analysis and prokaryotic expression of a new cDNA encoding the general odorant binding protein Ⅰ from Spodoptera litura (named as SlGOBP Ⅰ). 【Method 】 The cDNA encoding SlGOBP Ⅰ was isolated from the an