有效提取病毒诱导基因沉默植株中DNA的方法.pdfVIP

第28卷 第6期 植 物 研 究 2008年 11月 VoIl_28 No．6 BULLETIN OFB0TANICALRESEARCH Nov．， 2008 有效提取病毒诱导基因沉默植株中DNA的方法 何秀霞 于源华 果洪宇 张淑华 (长春理工大学生命科学技术学院，长春 130022) 摘 要 根据PCR反应的要求，用改 良的CTAB法，以番茄植株为材料，实现了微量番茄叶片基 因组DNA的快速提取。提取基因组DNA所用的组织量少，所得的DNA经过电泳检测虽有降解， 但足以用于PCR检测，以其作模板扩增中国番茄黄化曲叶病毒诱导的硫黄素酶(s“)基因沉默植 株中病毒组分中的DNAm5[和1．7A，片段大小分别为1300、500bp。测序结果证明是相应基因的 部分片段。该方法的材料不需要使用液氮，可以单人大批量提取，并在基因沉默的番茄植株中能 稳定而准确的规模化PCR检测。 关键词 PCR；DNA微量提取方法；番茄 中图分类号：Q789 文献标志码：A 文章编号：1673—5102(2008)06—0726—04 A EffectivePreparationM ethodforDNA from Gene SilencingPlantInducedbyVirus HEXiu--Xia YUYuan-H·ua GUOHong-·Yu ZHANGShu—-Hua (CollegeofLifeScience，ChangchunUniversityofScienceandTechnology，Changchun 130022) Abstract AccordingtotherequirementofPCR，with theimprovedCTAB method，takingtomatoas material，themini-preparation DNA oftomato leafwasrealized；Although theorganization quantity whichusedtoextractthegenomeDNA iSfew，andthegenomeDNAhasdegeneratedaftertheelectro． phoresis，butwassufficientforusesinthePCR examination．takingitasthetemplatetoamplifythe DNAm5[and1．7AoftheSugenesilencingplantinducedbyTomatoyellowleafcurlChinavirus．the fragmentsizewas1300bpand500bp，respectively．Theresultofsequencedeterminedistheeo~espond— inggenepartialfragments．Thismethoddoesnotneedtouseliquidnitrogen，canoperateindependently， andcanstablelyandaccuratelyfonnalizatedthePCR examinationinthegenesilencetomatoplant． Keywords PCR；methodofmini-preparationDNA；tomato DNA是生物遗传信息的载体，快速提取高分 加速并简化接种植株的基因组DNA的提取尚未见 子量、纯净的DNA是进行核苷酸序列测定、基因文 报道，笔者为此展开了此项研究。本研究在前人的 库构建和基因功能鉴定等研究 的重要前提步 研究基础上 ’5，oJ，根据病毒诱导的基因沉默植株 骤 。目前 国内外 关于 提取 DNA 的方法 很 中PCR检测病毒组分的要求，即本研究中所用的 多 。，但因为研究的对象和 目的不同而有所差 中国番茄黄化曲叶病毒属