类球红细菌降解敌敌畏特性初步的研究.pdfVIP

类球红细菌降解敌敌畏特性初步研究 赵凯1’3于影1王栋2张洪勋1白志辉1‘ 学，北京100083) 摘要类球红细菌具有广泛的代谢方式，它能够发酵生产5．氨基乙酰丙酸、辅酶Q10、类胡萝卜素、氨气等，已经成为一种 非常有工业化开发潜力的微生物。本文报道了一株从土壤中筛选的类球红细菌，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微 生物中心的保藏编号为CGMCCNo．0645，研究了它高效降解敌敌畏的新功能，显示出其在无公害农产品生产中的应用潜力。 引言 可以在多种生长条件下生长。如它具有广泛的能量代谢机制，包括：光合作用、无机营养、好氧和厌氧呼 血红素(heme)、维生素B12等…。 大量研究文献表明，类球红细菌已经成为一种非常有工业化开发潜力的微生物。比如，已有多篇文章 报道了利用类球红细菌发酵生产5一氨基乙酰丙酸(ALA)¨“圳；ALA可促进植物叶绿素合成，增强植物抗 逆性，促进植物生长¨”。用类球红细菌来生产辅酶Q。。的文献也很多¨。¨；辅酶Q。o是人体内具有重要作用 的辅酶之一，又称泛醌，它在体内呼吸链中质子移位及电子传递中起重要作用，是细胞呼吸和细胞代谢的 激活剂，也是重要的抗氧化剂和非特异性免疫增强剂，已经广泛应用于临床药物、保健品和化妆品h“’引。 还有文献报道了类球红细菌发酵生产类胡萝卜素n1、氢气喁’蚍等。我们也发现了类球红细菌促进植物生长的 取得了长足进展…。 业生产与害虫防治中应用广泛，但其残毒容易造成环境与食品污染，因此，世界各国都对其农产品制定了 相应的残留标准，如：中国国家标准中对水果、蔬菜中敌敌畏残留的限量为≤0．2mg／kg，欧盟对茶叶中 敌敌畏残留的限量为≤0．02mg／kg。对于消除敌敌畏农药残留造成的污染，微生物降解是一种安全、有效 的方法u叫。目前，已有微生物降解敌敌畏的相关研究论文发表…’坨1，但还未见有关类球红细菌降解敌敌畏 的研究论文。 我们从土壤中分离到一株类球红细菌，保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏 编号：CGMCCNo．0645，本文报道了它的培养条件，及其对敌敌艮农药的高效降解作用，显示了它在无公 害农产品生产中的应用潜力。 1材料与方法 I．I类球红细菌及其培养基 实验采用类球红细菌(Rhodobacter ℃冰箱，半年转接一次。 液体培养基配方(g甩)：蛋白胨5，酵母膏5，氯化钠5，调pH至6．8。 1．2类球红细菌的培养和计数 将斜面保存的菌种接种到盛有100mL液体培养基的三角瓶中，共3瓶，置于光照培养箱中，于32℃ 特性∞1。鉴于类球红细菌的巨大应用潜力，美国休斯顿得克萨斯大学健康科学中心微生物学和分子遗传 学系的研究人员已经开展了类球红细菌基因组计划研究，测序工作已经于2006年完成，功能基因研究也 ·通讯作者，E-mail：z13bai@rcees．ac_．en 基金项目：国家自然科学基金资助 50 L 下，l r／min摇床振荡培养24h，得到液体种子。按照5％的接种量将摇瓶活化的液体种子接种到盛有4 6．7，通气量5L／min，温度32℃，培养26小时。采用平板菌落计 液体培养基的发酵罐中，发酵液初始pH 数法计算培养液中的活菌数(CFU)。用pH计测定发酵液pH。 rDNA 1．3类球红细菌原位PCR直接扩增16S 使用细菌16S M=C或A)和1492r rDNA通用引物27f(5’-AGAGlTrGATCMTGGCTCAG 16S min，72℃延伸1min， rDNA。PCR反应条件为：先95℃预变性5min，然后94℃变性1min，50℃退火1 共30个循环，最后在72℃下延伸10 rDNA序列分析 将类球红细菌16SrDNA的PCR产物送交上海生工生物工程技术服务有限公司测序。将所得序列录入 NCBI网站的Blast程序，与GenBank数据库中已有得序列进行比对。 1．5类球红细菌在水溶液中降解敌敌畏