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转化医学在中药方剂愈骨疗伤方开发中的应用 陈海飞 鲍蕾蕾 卞俊 袁兵 中国人民解放军第四一一医院药学科，上海，200434 摘要：本文从转化医学的角度，介绍中药方剂愈骨疗伤方治疗军队训练伤的作用，包括该方剂前期在临床治疗军 队训练伤的情况，传统方剂向临床药物转化的研究过程和结果，并通过动物实验评价药物的有效性和安全性，确保新 药临床前研究能有效的转向临床应用。在完成临床到实验室的过程后，又将愈骨疗伤胶囊在临床实践中加以初步的推 广应用，结果显示，转化成临床药物后，该药物能有效的治疗军队训练伤。通过该研究过程，证实中药方剂的疗效和 安全性，并确保药物工艺稳定、质量可控，实现了对中药方剂的开发，为目前方剂的研究提供思路启发。 转化医学与中药现代化高峰论坛(2012) 因此同时考察以水为溶剂和以醇为溶剂的提取工艺，并采用正交试验法考察溶剂，体积，时间等因 素对药材提取率的影响，获得最佳的提取工艺。基于指标性成分和有效性成分之间存在着较大差异， 指标性成分的多少不能完全表明药物的有效性，单纯的以指标性成分的含量高低来确定制剂的提取 工艺，正不断的转向以药效学研究结果来确定制荆提取工艺，因此，通过家兔骨缺损模型评价愈骨 疗伤方经不同提取工艺后的作用差异。 正交试验结果显示，醇提工艺的转化率综合评分为1060A，水提工艺的转化率综合评分为94％， 以醇提为优；药效评价中X片结果及血液生化学指标均显示，在相同生药量下，醇提工艺治疗骨伤 与水提工艺治疗骨伤的效果基本保持一致，表明现代提取技术保留了方剂所有的治疗骨伤的活性成 分；从验证实验的得率中可知，醇提取的得率约为18％，而水提取物的得率为33％，表明醇提工艺 在一定程度上去除了无效成分，将活性成分进行了浓缩：从提高制剂质量，减少患者药物用量角度 出发(用药量下降50％)，以醇提工艺为佳L2。。’ 2．2提取物质量控制 一 一 通过薄层色谱法鉴别了制剂中续断、地黄和白芍，从薄层色谱图中可见，在与对照品相同位置 显相同颜色的斑点，初步表明醇提工艺能保留大部分指标成分。 通过HPLC法测定制剂中川续断皂苷Ⅵ和柚皮柑的含量，以这两个主要活性成分的含量为指标， 对制剂的质量进行控制，并进行方法学研究。，结果显示在色谱条件为C18柱，流动相为水一乙腈梯度 oA，重复性 良好的线性关系(r=0．9999)；川续断皂苷和柚皮苷的日内精密度RSD为O．82％和0．31 可用于愈骨疗伤方提取物的质量控制【引。 3．动物实验与转化研究的结合 要实现新药临床前研究有效的转向临床应用，其核心内容就是达到药物有效性和安全性的应用 目标。对于有效性研究，关键的问题是在所观察的动物反映的症状或表现中，要与研究的目的一致， 尽管相关因素各有不同，但在某些方面能够反映出这与人类疾病表现一致的作用，就达到了转化目 标，实现了转化要求。对于安全性研究，在临床前研究中是最应受到关注的重要内容，明确可信的 安全性结果对于完成究的转化起到关键作用。 在愈骨疗伤方转化成临床药物愈骨疗伤胶囊后，结合转化医学研究要求，开展了其有效性和安 全性研究。 3．1有效性研究 军事训练伤常见的是关节损伤、肌肉损伤及应力性骨折等。临床表现为局部疼痛、肿胀、皮下 瘀血、肢体运动不便。结合上述临床症状，针对性地开展有效性研究，主要包括抗炎镇痛、活血化 瘀和愈骨续伤lJ。 通过小鼠耳肿胀实验，大鼠足肿胀实验实验观察愈骨疗伤胶囊的抗炎作用。结果显示愈骨疗伤 连续灌胃给药7d后，二甲苯导致的小鼠耳肿胀度从13．09mg降至6．54mg，肿胀度抑制率为50％， 与对照组相比，有显著性差异：角叉菜胶导致的大鼠足肿胀，其肿胀度在造模后lh从0．60ml下降至 伤胶囊具有一定的抗炎作用。 在镇痛作用研究中，采用小鼠醋酸扭体实验。结果显示愈骨疗伤胶囊连续灌胃给药7d后，小鼠 在活血化瘀作用研究中，通过测定造模家兔的全血粘度和血浆粘度，发现愈骨疗伤胶囊能降低骨折 转化医学与中药现代化高峰论坛(2012) 化瘀作用。在愈骨续伤作用研究中发现，其能显著改善骨缺损，骨痂形态学提示其对骨折修复有促 进作用。 3．2安全性评价 小鼠急性毒性实验结果表明愈骨疗伤胶囊灌胃给药对小鼠的LD