提高水稻二倍体花粉植株诱导率的方法.pdfVIP

遗传 HEREDITAS 1(5):3-38 1979 提高水稻二倍体花粉植株诱导率的方法 胡 忠 梁汉 兴 （云南植 物研 究 所） 目前按花药培养的一般方法培养的粳稻花 瓶置8-10℃低温处理4天，或再置260C陪养 粉植株中，有占40务左右的单倍体tit［。水稻的 2天，然后将附着有培养液的花药转移到没有附 单倍体植株完全不育，．用秋水仙碱处理单倍体 加秋水仙碱，但附加NAA2mg/l和激动素。2 植株的分0节及生长点妇方法可以便单倍体植 mg/1的琼脂培养基上，诱导出愈伤组织，再分 株部分加倍而结实，但这样延长了花粉植株进 化出苗。根据花粉植株的穗部形态和育性，容 人田间选择的时间，而且由于秋水仙碱昂贵和 易判别其倍性 （图版I)o 工作量很大，实蟒上难以进行。因此，从改进水 表 1是用品种作的一组试验结果。可以看 稻单f}体育种程序考虑，如何在花药培养中提 出：用50-250mg/l秋水仙碱处理，提高了愈 高纯合二倍体花粉植株的诱导率就具有重要的 伤组织诱导频率，花粉植株中二倍体的比例由 意义。 53.8 增加到 ”.2多，单倍体则显著减少。这 已有的资料表明：在花药培养的去分化培 样，二倍体花粉植株总的诱导率提高为对照的 养基中加大生长素的用量；延长愈伤组织在去 2.5倍。此外，经秋水仙碱处理所诱导的花粉植 分化培养基上生长的时间；或将愈伤组织进行 株移栽成活率比对照高，这是因为对照的单倍 继代培养，这些方法都可以增加自然加倍频率， 体多，单倍体苗弱，移栽时较易死亡。 但同时也伴随着愈伤组织分化率的下降。在去 在上述试验用25Omg/1秋水仙碱处理所诱 分化培养基中用NAA和动力精配合代替2,4- 导的二倍体花粉植株中，有二株异常矮小，但对 D，或提高培养基的蔗糖浓度，可以改善愈伤 照中也有一株这样的植株，所以尚未看到秋水 组织分化状况，但同时也降低了自然加倍频 仙碱处理会产生诱变作用。 率，，〔。这样，通过调节核内有丝分裂过程来提高 表2所示的试验结果表明：用，OOmg/1较 自然加倍率与愈伤组织的分化率之间有矛盾。 高剂量的秋水仙碱处理，导致愈伤组织分化率 我们的试验表明，在花药培养初期用低剂量秋 下降，白苗比例有所增加，可与表 1的结果相 水仙碱等处理培养物是解决这个矛盾的一种有 似：秋水仙碱处理提高了加倍频率，花粉植株 效方法。 移植的成活率也比对照高。与表1相比，表2 试验采用我们拟定的水稻花药培养改进方 对照组的二倍体比例比较高，单倍体比例较低， 法2「1。首先，将单核晚期至双核初期的花药接 这与移栽时死亡的植株数较多有关。另外的试 种在液体培养基上漂浮。培养液的成分是N,培 验也表明：按前面介绍的方法，秋水仙碱以在 养基附加2,4-Dlmg/l及不同量的秋水仙碱， 250mg/l以下为宜。 蔗塘3多。秋水仙碱配成1-5多的70多酒精 用醋酸洋红染色方法21〔，观察了花粉发育 的无菌母液。培养液先装在100m1三角瓶中热 初期的形态。结果发现：秋水仙碱处理的花药 压灭菌后，再用注射器吸取适量的秋水仙碱母 中容易观察到大核的花粉细胞，约有2.3-2.5多 液加人，然后分装到已灭菌的10或25m1小三 的花粉细胞，其核的直径为正常核的二倍以上， 角瓶中，每瓶3-5ml。将接种有花药的小三角 而在处理的对照中这类细胞的比例却在0.3拓 ·37 表1秋水仙碱处理对水稻花粉植株的诱导及倍教性的影响 剂 量 培 养 愈 伤 诱导率 分 化 绿苗率 移植花粉 存活 不同倍性植株 （％） 二 倍 体 ms/1) 花药数 组织数 %) 绿苗数 （％） 植株数 株数 单倍体 二倍体 多倍体 诱导率 （％） 一U 斗87 37 12 32.4 is 13 3