PRRSV+GP5基因和猪IL-18基因共表达真核表达系统的建立.pdfVIP

331 抗病遗传育种与繁殖技术专题 o T020073 PRRSV L一1 GP5基因及猪I8基因共表达真核表达系统的建立木 李国江“ 高 磊 丁 壮…王晓莉 宋德武 (吉林大学畜牧兽医学院，吉林长春130062) 目的 and 猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcinereproductiverespiratorysyndrome virus，PRRSV)引起的一种具有严重危害的病毒性传染病，该病临床症状丰要表现为怀孕母猪的早产、 流产、死胎、木乃伊胎以及仔猪和生K猪的呼吸系统疾病和高死亡率。为了进一步研究PRRSVGP5蛋 白的免疫功能及猪IL—18对动物免疫应答的调节作用，本研究以PRRSV 为靶蛋[j的核酸疫苗以及细胞凶f对PRRS核睃疫苗免疫效果的影响烫定了实验基础。 材料方法 根据GenBank登采的PRRSV IL—18基【大】的核苷酸序列，设计2对引物分别扩增GP5,{=UIL．18片段。 7 GP5：F5 7， g△丛煎ATGrrGGGGAAGTGCTTG3 7 CTAGAGACGACCCC—汀TGTT3 R5’Q鱼盟￡￡cg 7 ILl8： F5’CTCGAGATGTACl_ITGGCAAGCTrGAA3 7 R5 (含有EcoR 扩增片段与pMD一18T载体连接，经克隆与序列测定，将正确的重组质粒双酶切，将两个目的基因克隆 Western—blot鉴定构建的真核表达质粒pEGFP—ILl8．ORF6的正确性。 结果 经测序鉴定，成功构建含有PRRSV 蛋白表达。SDS．PAGE和Western．blot鉴定表明表达产物具有特异免疫学反应。 讨论 GFP已用于基囚表达的报告、细胞动态的研究、活细胞的定位以及蛋白质印迹检测中。本实验成功 通过对绿色荧光蛋白和蛋白质印迹检测证实了目的基斟在真核细胞r|I表达。本实验通过RT-PCR技术， +基金项H：广东省科技关攻乖犬项日(2008A020100020)。 ++佧冉简介：李l目江。男，教授．在读博上．研究生，主受从事分子病毒学及动物疫病防控研究。 -}+通汛作者：Ding—zhuang@yahoo．com．cn。 332蟋》2011年学术年会 进行表达，为下一步建立核酸疫苗，为研究基于以EGFP为报告基因的ILl8．GP5为靶蛋白的核酸疫苗以 及细胞因子对PRRS核酸疫苗免疫效果的影响奠定了实验基础。 参考文献(略) T020080 猪To II样受体4(TLR4)基因多态性研究 徐如海戴丽荷褚晓红路伏增 胡锦平 (浙江省农科院畜牧兽医研究所，浙江杭州 310021) 引言／目的 ToLL受体(TLRs)是免疫系统中的一类霞要膜受体，可启动一系列与损伤相关分子模式有关的免 疫反应。作为TLR家族一员的TLR4最初被认为是革兰阴性细胞细胞壁成分脂多糖(LPS)的识别受体。 明TLR4在抗细菌、抗病毒的炎症反应及应激状态下均能发挥重要作用。越米越多的数据表明，TLR4 单核