重视病理特殊染色方法应用.pdfVIP

2009年全国病理学技术进展和应用研讨会 重视病理特殊染色方法的应用 00730) 刘红刚张叠忠张勇朴颖实田澄(首都医科大学附属北京同仁医院病理科1 目Ij{『，虽然分了生物学等研究方法已渗透到秤个领域，但许多传统的病理学特殊染色方法仍然是 显示》卤原体、组织及细胞内特殊结构的简便而可靠的方法。现重点介绍和讨论我院在LJ常‘丁作中常用 的几种特殊染色方法及应用的体会。 一、Warthin．Starry特殊染色方法及其应用 有关此方法在疾病诊断和研究中的综合介绍较少。现就其染色方法及其在病理领域中的应用状况作 一简要【uI顾和介绍。 l、WS法试剂配制及染色步骤 嗜银反应。染色的机制被认为是螺旋体表面的粘蛋臼与银的结合。虽然经过多次改进，但其基本的染 液配制和染色步骤未变。 (1)染液配制 ①酸性水溶液：取三蒸水100ml，逐滴加入1％柠檬酸调整pH值为4．0 ②l％硝酸银溶液(镀银液，43℃保存)：硝酸银1．Og加酸性水溶液lOOml ⑨2％硝酸银溶液(显色用，54 4C保存)：硝酸银2．09加酸性水溶液100ml ④5％明胶水溶液(保存在54℃)：明胶lO．09加酸性水溶液200ml ⑤0．15％对苯二酚水溶液(保存在54℃)：对苯_酚0．159加酸性水溶液100ml 0．15％对苯■酚溶液20ral，于使用Ij{『混合。 (2)染色步骤 ①切片脱蜡入水一三蒸水洗3次 ②1％硝酸银溶液43℃，30s ③显色液54℃，2～8s(切片旱黄色全浅褐色) ④54C蒸馏水快速允分冲洗一蒸馏水洗一脱水一透明。 需要强调的是，本方法在pH值、时问和操作细节上都必须严格掌握，染液的鼍可按实际需要按 比例增减。 二、WS法的应用 在后来的研究中发现，WS法除可显示螺旋体外还可显示鼻硬结杆菌、猫抓病球杆菌、黑色素颗 粒、真菌、球菌、神经纤维、尘埃颗粒及胃幽门螺杆菌等。 I、显示螺旋体 pallidum，TP)、伯氏包乘疏螺旋体(Borrelia Vincenti， 口咽部梅毒误诊病例30余例，并埘这些病例进行了观察研究，指出其临床特点是久治／卜愈的慢性咽 29· 2009年全国病理学技术进展和应用研讨会 炎，组织病理学特征是黏膜上皮层内微脓肿形成，同有膜有浆细胞、组织细胞大最浸润，WS染色 在渗出物及黏膜上皮层内可见到大芾螺旋体，TP血清学检畲阳性，符合上述条件者，即可确定诊断， 提出这种新的生殖道外TP感染现象和趋势应引起注意。 2、显示鼻硬结杆菌 1 870年vonHebia首先描述了鼻硬结症。它是山克雷伯菌属鼻硬结杆菌(Klebsiella 显示出Mikulicz细胞内短棒状鼻硬结杆菌，并用免疫荧光法和电镜证实了WS法显示鼻硬结杆菌的可靠 性。这种显示鼻硬结杆菌的方法优于Geimsa、美蓝等染色法，原冈在于它能把背景和细菌显著|又：分 开，而后者在组织切片中细菌与细胞、组织背景区分困难。冈此，WS法也被常规作为显示鼻硬结 杆菌的首选方法，在鼻硬结症的病冈学诊断及研究中已必1i可少。 3、显示黑色素颗粒 法，其中二者效果相?’者有20例，WS染色不显示在F．M染色法中常被着色的福尔马林、铁、脂褐 素和其它嗜银颗粒。认为W．S法能更清楚、容易且较特异地显示出黑色素颗粒，111WS染色阳性时 即有可能确认为恶性黑色素瘤，若w—S染色阴性则排除黑色素性肿瘤史具有信心。WS染色为恶性黑 色素瘤的病理诊断提供了一个辅助方法。 4、显示猫抓病球杆菌 尽管此菌的细菌培养和动物接种至今仍未成功，但目前它们仍被认为是猫抓病的病原菌。 权威Palmer观察了1000多例胃活检标本后报道胃内未见螺杆菌，认为即使胃内见到螺杆菌也是经口进 Perth医 入的过路菌，台