反应停对裸鼠移植人卵巢癌细胞OVCAR-3的作用观察.pdfVIP

山东医药2008年第48卷第 39期 反应停对裸 鼠移植人卵巢癌细胞 OVCAR一3的作用观察 任 亮 ，张延新 ，马 菲 ，杜钢军 (1漯河医学高等专科学校，河南漯河462002；2漯河市源汇区 妇幼保健院；3河南大学药学院) [摘要] 建立裸鼠移植人卵巢癌细胞 OVCAR-3模型，分别给予不同剂量的反应停灌 胃。实验结束后处死动 物，称取鼠重并进行 比较。计数肿瘤组织微血管密度 (MVD)。Western-blot法检测肿瘤细胞环氧在酶(c0x)．1、2。 结果各组裸鼠体内肿瘤的体积、体质量及 MVD均呈现剂量依赖性降低 ，中、高剂量反应停组与对照组相比，P分别 0．05、0．01。各组肿瘤细胞的COX-1表达无明显变化，COX-2表达随反应停剂量增大逐渐降低 (P0．05)。认为 反应停对对裸鼠移植人卵巢癌细胞 OVCAR-3的生长具有抑制作用，此作用可能与反应停的抗新生血管形成及抑制 肿瘤细胞COX-2等有关。 [关键词] 肽胺哌啶酮；卵巢肿瘤 ；微血管密度；环氧化酶 [中图分类号] R965 [文献标识码] B [文章编号] 1002-266X(2008)39．OO2802 近年的临床研究表明，反应停 (肽胺哌啶酮)的 抑瘤率。肿瘤组织部分冻存，部分用 10％甲醛固定 抗骨髓瘤作用可能与其抑制肿瘤细胞诱发的血管生 后制作石蜡切片。 成有关。为进一步研究反应停的抗癌作用，我们对 1．2．2 肿瘤组织中微血管密度 (MVD)的测定[2 反应停抗裸 鼠移植人卵巢癌细胞 OVCAR3的作用 采用免疫组化 sP法，DAB显色，苏木素复染，染色 进行观察，初步探讨其作用机制。 步骤按照说明书进行。一抗浓度 ：抗Ⅷ因子多克隆 1 材料与方法 抗体为 1：50，羊抗兔 IgG-HRP为 1：100。以PBS代 1．1 动物与瘤株 裸 鼠(BALB／C)，重 18～22g，无 替一抗作阴性对照，用已知阳性切片作阳性对照。 特殊病原菌 (sPF)条件下饲养。人 卵巢癌细胞 按文献标准判断。 OVCAR．3，复苏后接种于BALB／C裸鼠传代。 1．2．3 肿瘤细胞中环氧化酶 (C0x)的表达情况口] 1．2 方法 COX的表达采用 Western．blot法。二氨基联苯胺 1．2．1 抑瘤实验_1] 取裸 鼠体 内生长 良好的肿瘤 显色后用扫描仪进行扫描，应用 CMIAS真彩色医学 组织块研磨成细胞匀浆，吸取细胞液，调细胞数 1× 图像分析系统测定条带灰度值。一抗浓度 ：兔抗 1(y6，Il1l，按0．2ml／只接种于裸 鼠右侧腋窝皮下。将 COX一1／2单抗为 l：500，羊抗兔 IsG—HRP为 1：1000。 接种肿瘤后的小鼠按体质量分为5组，各 8只。① 以兔抗一actin的化学成像作为对照。按文献标准判 正常对照组：生理盐水灌 胃；②反应停低剂量组：反 断COX的表达。 应停 100ms／(kg·d)灌胃；③反应停中剂量组：反应 1．2．4 统计学方法 采用 SPSS11．0统计软件。组 停200ms／(kg·d)灌 胃；④反应停高剂量组：反应停 间数据比较用单因素方差分析。P≤0．05为差异具 400mg／(kg·d)灌胃；⑤反应停瘤后组：于肿瘤接种后 有统计学意义。 可触及到瘤块时用反应停400mg／(kg·d)灌胃。除 2 结果 反应停瘤后组外，其余各组均于肿瘤接种后次 日开 反应停对裸鼠移植 OVCAR．3后肿瘤生长、MVD 始给药，灌 胃容积为0．2roll10g，1次／d，连续 20～ 及 COX表达的影响 见表 l、2。 30d。当用手触及裸 鼠皮下长出瘤块后，每 3d测量 3 讨论 肿瘤长径(a)及