泛亚型口蹄疫病毒O／China／99缺失毒株全长cDNA分子克隆的构建.pdfVIP

中国兽医科学 2008，38(11)：925—928 ChineseVeterinaryScience 中图分类号：S852．659．6：Q786 文献标识码 ：A 文章编号：1673—4696(2008)110925—04 泛亚型 口蹄疫病毒 O／China／99缺失毒株全长 cDNA 分子克隆的构建 吕建亮，张永光 ，王永录，潘 丽，刘力宽，方玉珍 ，蒋守田，张维德 (中国农业科学院 兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 农业部畜禽病毒学 重点开放实验室 ，甘肃 兰州 730046) 摘要：设计并合成了4条 ()型 口蹄疫病毒 (FMDV)泛亚型代表毒株 ()／China／99基因组的引物，利用 RT—PCR扩增各基 因片段 ，酶切后连接到 p()K12栽体上，然后人工合成一段缺 失PKs的5UTR序列，利用 两端的限制性 内切酶位点，将该基因片段插入到上述载体中。酶切、PCR和序列测定结果显示，O／China／99 株全基因组由8200个核苷酸组成 ，构建的感染性 cDNA与原毒株 的核苷酸序列 同源性为 99．1 。结果表 明，O／China／99缺失毒株全长cDNA分子克隆的构建成功。 关键词 ：1：2蹄疫病毒；全长 cDNA；反向遗传学；PKS Construction offull-length cDNA cloneofdeleted foot—and—mouthdiseasevirusPan-Asiastraino／China／99 IU Jianliang，ZHANG Yong—guang，W ANG Yong—lu，PAN Li。LIU Li—kuan， FANG Yu—zhen，JIANG Shou—tian，ZHANG W ei～de (KeyLaboratoryoyAnimalVirologyoftheMinistry0厂Agri~ulture／StateKeyLaboratoryofVeterinaryEtiological B ozog≯／ln，lzh(HgeterinaryResear(hInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciemes，Lanzhou730046China) Abstract：Twopairsofprimersweredesignedandsynthesizedaccordingtothegenomesequenceofde— letedfoot—and—mouthdiseasevirus(FMDV)type()Pan—AsiastrainO／China／99．Twoamplifiedfragments from thegenomeof()／China／99strainandaartificially—synthesized5UTR sequencedeletedPKswere clonedinto p()K 12 vector．Therecombinantwasidentified by restriction enzymedigestion，PCR and se- quencing，respectively．ThewholegenomeofFMDV ()／China／99strainswas8200ntinlength．Thenuc leotidesequenceofthefulllength cDNA shared99 ． 1 identitieswiththestrainO／China／99．Theresults showedthatthefulllengthcDNAcloneofFMDVO／China／99strainwasCOnstructedsuccessfullv． Keywords：foot—and—mouthdiseasevirus；fulllengthcDNA；reversegenetics：PKs 口蹄疫 (footand—mouthdisease，FMD)是 由口 structures，PKs)，PKs是 FMDV 5端功能未知区的 蹄疫病毒 (foot—andmouthdiseasevirus，FMDV)引