禽肉瘤白血病病毒重组载体的包装及病毒滴度的测定.pdfVIP

第 53卷第 22期 湖 北农 业科 学 Vo1．53No．22 2014年 11月 HubeiAgriculturalSciences NOV．，2014 禽肉瘤白血病病毒重组载体的包装及病毒滴度的测定 龚 萍 ，杨 字 ，杨永平 ，叶胜强 ，王丽霞 ，邓 兵 ，喻 婷 ，钱运 国 ，龚炎长 (1．武汉市畜牧兽医科学研究所 ，武汉 430208；2．武汉市畜牧科技推广站 ，武汉 430012； 3．华 中农业大学动物科技学院．武汉 430070) 摘要 ：将重组逆转录病毒融合蛋 白表达栽体RCASBP—GFP—SMARCE1包装为病毒颗粒 ．并测定其病毒滴 度。利用脂质体转染法在 DF一1细胞系中转染重组质粒 ，收集上清液 ，超速离心浓缩病毒 ，用GFP标记法 测定病毒滴度 。结果显示 ，转染后 3-4d可见少许 GFP阳性细胞的出现 ，6～7d后所有细胞均有 GFP的表 达 ，lld左右细胞达到超汇合状态 ．开始收集上清液 ：GFP标记法测定超速离心后 的病毒滴度为 5x10m IU／mL。结果表 明．成功制备 了高滴度的重组逆转录病毒颗粒 ，为下一步在胚胎 中进行相关基 因的功能研 究奠定 了基础 关键词 ：逆转录病毒栽体；病毒包装：绿色荧光蛋 白：病毒滴度 中图分类号 ：$852．650．3 文献标识码 ：A 文章编号 ：0439—8114(2014)22—5470—04 DOI：10．14o88~．cnki．issn4039—8114．2014．22．036 RecombinantVectorPackaging ofAvian Sarcoma LeucosisVirusand ViralTiterDetermination GONG Ping，YANG Yu ，YANG Yong-pingz，YE Sheng-qiang，W ANG Li-xia，DENG Bing，YU Ting， QIAN Yun-guo，GONG Yan-zhang3 (1．WuhanInstituteofAnimalHusbandryandVeterinaryScience，Wuhan430208，China； 2．WuhanAnimalHusbandryScienceand TechnologyExtension Station，Wuhan 430012，China； 3．CollegeofAnimalScienceandTechnoloyg ，HuazhongAgriculturalUniversity，Wuhan430070，China) Abstract： The recombinant retrovirus vector RCASBP—GFP—SMARCE1 was transfected into the DF —l cells using lipofectamine．The supernatants were harvested and concentrated．Viral titer was assessed with GFP—labeled method．The resultsshowed thatafeW cellsofGFP positive exhibited 3—4 dayslaterand allthe cells showed GFP expression 6—7 days later．The supernatantswereharvested 11dayslaterwhen the cellsbecome supereonfluent．Theviraltiterwas 5~10 IU／mL． Itis indicated tha