HBCDyou导鲫鱼ROS和HSP70的产生及分子致毒机制.pdfVIP

持久性有机污染物论坛2007暨第二届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 王晓蓉卜，苏燕1，罗义1’2 (1南京大学环境学院污染控制与资源化研究国家重点实验室，江苏南京210093； 1．引言 flame 溴化阻燃剂(brominated 材料中，用来防止燃烧或者减缓燃烧。目前，在全球大气、水体、沉积物和生物体中普遍检出BFRs 【1】。这些BFRs能在环境介质中长距离迁移、并且难降解，具有持久性有机污染物的特性，对环境 造成的负面影响极有可能成为“21世纪的PCBs”，因此目前迫切需要加强BFRs毒理学的研究，以 期对其生态安全做出准确和全面的评估。 本文以幼龄鲫鱼为材料，研究BFRs的成分之一六溴环十二烷(HBcD)对于鲫鱼脑肝鳃组织 中应激蛋白(stress proteins)HSP70的影响、肝组织活性氧(reactiveoxygen 生和氧化胁迫情况，为寻找水环境生态安全早期预警指标，探讨分子致毒机制提供理论依据。 2．材料与方法 2．1实验生物及染毒条件 鱼在除氯自来水中驯养7d。 将健康活泼、体表无损伤的鲫鱼随机放入35L鱼缸中，每缸8条鱼。静态试验将鲫鱼暴露于0， 0．0025、0．005、0．01、0．05、0．112d：动态试验将鲫鱼暴露于0．5 0、l、3、 mg／LHBCD mg／LHBCD 5、7、14、20d。采用静态置换法每天更新一半溶液。 2．2取样及样品预处理 将鲫鱼取出，冲洗后擦干，称重，解剖，取出鲫鱼脑肝鳃组织，迅速称取适量放入冰浴的玻璃 总蛋白含量，酶活性及脂质过氧化。 2．3生物指标的测定 为标准蛋白。ROS采用PBN捕获及EPR测定[6】。HSP70的测定采用WesternBloaing方法【7】，所 得结果用凝胶分析系统分析灰度值，用实验各组相对灰度值(实验组灰度值／对照组灰度值)表示。 SPSSl3．0for windows软件进行单因素方差分析，po．05时表示有显著性差异。 3．结果与讨论 3．1HBCD动态暴露 动力学实验表明，暴露5d鲫鱼肝脏活性氧受到诱导，7d时诱导达到最大(为对照组的181％)， 与对照组相比具有显著性差异。鲫鱼肝脏中诱导产生HSP70与暴露时间大体呈现倒U型关系：Y= ．O．0072x2+0．1388x+1．2606，R2=O．89。 露ld时即受到诱导，5d后活性基降至与对照组相同直至实验结束。 持久性有机污染物论坛2007暨第二届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 0．6942，R2=O．86，p0．05)。 鲫鱼脑、腮组织中HSP70随暴露时间的变化与对照组相比没有显著性差异。 3．2HBCD静态暴露 HBCDeP显著诱导 HBCD暴露12d后，鲫鱼肝脏ROS产生随着暴露浓度的增加而增加。0．01mg／L 活性氧的生成。统计分析表明，鲫鱼肝脏中HSP70相对灰度值和活性氧产生强度两者呈良好的正相 关(R2=0．88，p0．05)。 CAT活性随着暴露浓度的增加轻微上升，O．1mg／L时与对照相比具有显著差异，且变化趋势与 性差异。GSH／GSSG比值随着暴露浓度的增加而降低。 ． 脑组织中HSP70的诱导情况不明显。鳃组织中HSP70的变化趋势和脑组织的类似，但其在浓 度大于0．01mg／L时受到显著抑制，相对灰度值仅为对照组的59％。 4．结论 HBCD在鲫鱼体内代谢过程中产生了活性氧而导致的氧化胁迫机制可能是其重要的致毒机制 之一：ROS对HBCD暴露响应敏感，有潜力成为指示HBCD对水体污染的生物标志物；鲫鱼肝脏中 HSP70与活性氧产生随浓度变化呈良好的正相关，HSP70的合成与活性氧可能有直接关系；肝中CAT 应激过程中GSH向GSSG的转变趋势；脑、腮组织中HSP70合成量的变化趋势基本。 致谢 本工作受国家自然科学基金重点项目资助。 参考文献： a1．Theenvironmentaloc