长叶蜈蚣藻多糖的结构及其抗凝血活性.pdfVIP

曩毽I11I 第三届童洋生物膏技术论坛 2005．08．19-23 长叶蜈蚣藻多糖的结构及其抗凝血活性+ 王顺春’宰，施松善，崔健，王峥涛，胡之璧 上海中医药大学中药研究所，上海201203 摘要：采用糖组成分析、甲基化分析、瓜等方法研究了长叶蜈蚣藻多糖成分的结构。同时对 长叶蜈蚣藻多糖抗凝血活性进行了探讨。研究结果表明长叶蜈蚣藻多糖主链由l，3和1，4 连接的D一半乳糖残基构成，由1，4和端基连接的木糖和葡萄糖构成的侧链位于半乳糖残基 的2位和6位。硫酸基团位于半乳糖残基的2位和6位。抗凝血活性研究表明长叶蜈蚣藻多 糖口服或静脉注射均能够较好的延长凝血时间，凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血酶时间 (APTT)，提示该多糖在抗凝血方面具有较好的应用开发前景。 关键词：长叶蜈蚣藻，多糖、抗凝血作用 刚舌 海藻由蓝藻、绿藻、红藻和褐藻四大类组成，约有近万种海藻分布于世界海洋中。海藻 中的生物活性物质结构各异，其中多糖类物质研究最为广泛。已有的研究表明海藻多糖在免 疫调节、抗肿瘤、抗突变、抗凝血、抗病毒等方面具有显著的作用，其中抗凝血和抗病毒一 直是研究的热点【I_5】。有关海藻多糖的抗凝血特性早在50年前就已有报道，迄今已有超过80 种海藻(包括褐藻、绿藻和红藻)中的抗凝血活性成分都被证实是硫酸化多糖。其中褐藻和 绿藻中硫酸化多糖的研究较为深入，有关红藻的结构及活性的研究则较少。我们对长叶蜈蚣 藻进行了较为详细的研究，包括结构、抗肿瘤、抗凝血、抗血管新生和抗HIV活性。本文报 道长叶蜈蚣藻的结构及其抗凝血活性的研究结果。 1实验材料与方法 1．1长叶蜈蚣藻多糖的分离纯化：新鲜采集的长叶蜈蚣藻，用自来水冲去表面盐分后切碎， 残渣按上述过程再提取一次。合并两次上清夜，搅拌下加入三倍体积95％T业乙醇，所得沉 淀复溶jj二水，对蒸馏水透析两天，加入三倍95％工业乙醇沉淀。沉淀经丙酮、无水乙醚洗涤， 复溶。J二蒸馏水，冷冻干燥得长叶蜈蚣藻多糖GLP。 1．2多糖纯度及分子景测定：按魏远安等[6】报道的方法进行HLPC，确定多糖的纯度与分子 量。 +J二海市青年科技启明星计划资助课题(03QDl4048) 4通讯作者。Emaih shunchunwang@yahoo．corn i藿ln‘ 第三屠海洋生物膏技术论坛 2005．08．19-23 还原性水解方法将多糖完全水解后制成乙酰化衍生物进行GC分析，以3，6一脱水半乳糖、 2一氧甲基半乳糖、6。氧甲基、半乳糖等的乙酰化衍生物为对照品确定糖组成。 1．4 IR分析：将多糖与KBr压片后进行。 1．5甲基化分析：采用Needst81等报道的方法将GLP全甲基化后按糖组成分析过程水解、还 原、乙酰化化后进行GC．MS分析，根据MS碎片特征确定单糖的连接方式。 1．6GLP抗凝血作用的考察：参照药理实验方法学【9】进行，以静脉注射和口服给药两种方式 考察GLP对小鼠凝血时问、活化部分凝血酶时间和凝血酶原时间的影响。 2结果与讨论 2．1多糖的得率及分子量：1．1kg新鲜海藻得到白色絮状GLPl109，得率为10．0％，该多糖经 HPLC测定为单一对称峰，表明其为均一多糖成分，以DextranT系列标准分子量葡聚糖计算 其分子量为100万道尔顿。 1)表明GLP主要含有半乳糖，另外尚含有6一 2．2多糖的单糖组成：糖组成分析结果(Table 甲基．半乳糖、2一甲基．半乳糖、3，6．脱水．半乳糖、木糖和葡萄糖。该多糖中还含有硫酸基团， 含：最为18。5％。 Tablel GLP及其衍生物的单糖组成测定结果 2．3 cm．1处宽峰清楚地表明GLP中含有硫酸酯基， IR分析：在GLP的Ⅱ己图谱中，1259．08 而位-『．935．125cm．1I佝吸收峰则提示该多糖中含有3，6．脱水半乳糖。在800．850cm．1区域 中在835．818 cm．1有一较宽的吸收峰，表明该多糖中的硫酸基的位置为2位或4位。但由于 该峰较宽，可能对820cm一1的吸收峰有所掩盖。不能由此判断6位没有硫酸基。对比碱处