人胚胎成纤维细胞的培养及饲养层的制备.pdfVIP

中国男科学杂志2008年第22卷第 1O期 21 人胚胎成纤维细胞的培养及饲养层的制备 王毓斌 陈 斌- 张志玲z 王颖超 王鸿祥t 向祖琼 卢永宁 胡 凯 杨怡珂 韩银发， 汪 铮 王益鑫 黄翼然 · 1．上海交通大学医学院附属仁济医院泌尿外科，上海市男科学研究所 (上海 200001)；2．妇产科； 3．上海市消化疾病研 究所干细胞实验室 摘要 目的 从人胚胎躯干中分离、培养人胚胎成纤维细胞，建立人胚胎成纤维细胞饲养层用于人精原 干细胞的培养。方法 利用酶消化法从孕 5-9周龄人胚胎躯干中分离培养人胚胎成纤维细胞，制作饲养层，使 用不同浓度丝裂霉素C处理，以细胞形态、生长 曲线作为胚胎成纤维细胞和饲养层的评价指标。结果 从人 胚胎中成功分离培养出人胚胎成纤维细胞，该细胞可传代 l5代 以上，且经过传代及冷冻复苏后生物学特性无改 变。12．5mg／L丝裂霉素C作用 2h可达到较好处理效果。结论 成功分离和培养人胚胎来源的成纤维细胞，用 于人精原干细胞饲养层的制作。 关键词 成纤维细胞： 胚胎： 细胞培养技术 中图分类号 R321．1 Cultureofhumanembryonicfibroblastsandproductionoffeeder layersforhumanspermatogonialstem cells W angYubin~,ChenBinp，ZhangZhiling2,WangYinChao。，W angHongxiang ，XiangZuqiong， LuYongning ，HuKai，YangYike，HanYinfa，WangZheng ，W angYixin ，HuangYiran ，．DepartmentofUrology，ShanghaiInstituteofAndrology，RenjiHospital，ShanghaiJiaotongUniversity，Schoolof Medicine，Shanghai200001，China；2．DepartmentofObstetrics—gynecology；3．ShanghaiInstituteofDigestive DiseaseStem CellLaborato~ Abstract 0bjective Toisolateandcultivatehumanembryonicfibrob1asts(hEFs)derivedfromhumanembryos， trunksandtoestablishfeederlayerculturesystem ofitforculturingofhumanspermatogonialstem cells．M ethods ThehEFswereisolatedbyenzymedigestionfrom thesubcutaneousconnectivetissueof5--to9--weekoldhuman embryos．DifferentcOncentrati0nsofm itomycinC wereusedtopretreatfeederlayer．TheeffectsofhEFsandfeeder layerswereassessedbycellmorphologyandgrowthcurves．Results ThehEFsweresuccessfullyisolatedand cultivatedfrom humanembryos，trunks．Theycouldbepassagedbeyondthe15thgeneration．Thebiologiccharacteris— ticsofthecellsdidnotchange，eveninhigh—passagecellsorrfozen—thawedcells．Theoptimalconcentratio