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中药有效成分的生物转化方法及其应用 张凡，姜艳艳，刘 斌’ 001 (北京中医药大学 北京1 02) 摘要：中药有效成分的生物转化是发现药物先导化合物的重要途径，是对中 药有效成分进行结构修饰和改造的重要手段。常用生物转化方法包括微生物转化法 和植物培养物生物转化法等，目前已成功用于中药有效成分，如黄酮、醌、生物碱、 苯丙素、甾和萜等的生物转化，预示了广阔的发展前景，值得进一步推广。 关键词：生物转化；中药；有效成分；应用 化合物的特定部位或基团进行化学结构修饰或转化的生化反应，其本质是酶的一 种催化反应n·川。生物转化技术所应用的生物体系主要有植物细胞、组织或器官 培养体系，动物细胞、组织培养体系，微生物体系以及游离酶体系等。由于具有 专一性强、催化活性高、条件温和易控制等特点，生物转化技术已成为国内外药 学、食品学等研究领域的热点。 由于药用植物资源日渐匮乏，且部分药材自身有效成分含量甚少，例如紫杉 醇、喜树碱、长春花碱、稀有人参皂苷等在植物体内含量约万分之几；中药有效 成分的化学结构复杂，不易用化学方法简单合成；一些高活性成分常伴随有严重 的毒副作用等多方面因素而制约了很大一部分中药有效成分的研究与开发。利用 生物体系中具氧化还原、羟化、水解、碳一碳键合成、特异反应等功能的多种酶， 对中药有效成分进行结构修饰来获得高活性、低毒性的先导化合物，从而对新药 的开发起到了积极作用。生物转化反应类型主要包括氧化反应、还原反应、羟基 化反应、甲基化反应、乙酰化反应、异构化反应、糖基化反应以及酯化反应等。 1生物转化研究方法 通讯作者：刘斌，男，教授，博士生导师。研究方向：中药(复方)有效成 63．com 分研究。Tel：(010E-mail：1iubinyn67@1 1．1微生物转化法 微生物具有种类多、生长速度快、遗传背景简单等特点，其应用于中药有效 成分的生物转化则具有转化时间短、转化效率较高、转化酶表达效率高、易于工 业化等优势。目前，药源性微生物主要为链霉菌、黏细菌、曲霉菌、青霉菌和海 洋微生物等¨’。微生物转化方法主要有：(1)分批培养转化法，待菌体培养生长 6l 到一定阶段再选择适当时间加入底物继续培养，特定菌体对不同底物的作用类型 和效率存在很大差异性，因此底物最佳添加时间和反应时间需进行考查；(2)利 用游离酶进行转化，即酶在生物体外对底物进行转化反应。一般需将酶纯化，以 提高转化率；(3)利用渗透细胞进行生物转化，主要适用于底物与胞内酶的转化 反应。在转化过程中需加入适量的表面活性剂，以提高细胞渗透性；(4)真菌孢 子转化法，真菌处于孢子状态时具有较高酶活性；(5)固定化细胞生物转化法， 具有转化效率高，转化产物易于释放分离、容易实现工业化生产等优点¨“1；(6) 静息细胞转化法，即控制菌体生长停留在特定状态，再对底物进行转化1。 1．2植物培养物生物转化法 植物培养物生物转化是通过植物细胞、组织和器官的培养体系对外源性底物 进行结构修饰的反应，具有重现性好、选择性强、催化类型较多的特点；其转化 体系主要包括有悬浮细胞培养体系、固定化细胞培养体系、毛状根转化体系、器 官培养体系和酶体系等。植物培养物生物转化中药有效成分的研究中，需要考虑 到以下因素对反应的影响：(1)转化体系类型对底物转化率有影响，一般认为固 定化细胞培养体系有利于植物功能分化和酶的形成，转化率较高；但其应用于大 分子底物的转化，则存在胞内产物释放受阻的不足；(2)细胞系的影响，即使同 种植物细胞在不同条件下获得的细胞株，对底物转化作用也存在差异，甚至会导 致产物结构不同；(3)植物细胞各生长阶段具有不同的生物转化能力，且转化产 物也存在结构差异，因此，底物的添加时间对产物的生成量和结构至关重要；(4) 底物添加浓度的影响，底物浓度在一定范围内时，转化率随底物浓度增加而增大； 但底物浓度过高会对细胞产生毒性，转化率反而会下降；(5)底物添加方式的影 响，对于一些水溶性较差的底物可以使用环糊精包合技术，从而避免使用有机溶 剂溶解底物而引起的细胞毒性；(6