小鼠胰岛分离纯化方法研究.pdfVIP

第6卷 第 2期 器官移植 V01．6 No．2 2015年3月 OrganTransplantation Mat．2015 · 实 验 研 究 · 小 鼠胰岛分离纯化方法研究 颜迪恩 周迎生 高秀莹 赵一楠 【摘要】 目的 探讨可提高胰岛产量和功能活性的小鼠胰岛分离、纯化的方法。方法 通过 胆总管逆行灌注胶原酶溶液消化小鼠胰腺 ，经不连续密度梯度离心后，人工挑取、纯化胰岛。过夜培 养后 ，用葡萄糖刺激胰岛素分泌实验 (GSIS)，检测胰岛功能。电子显微镜 (电镜)观察胰岛B细胞 亚细胞结构变化。结果 利用该改良方法平均每只小 鼠可收集 (200±20)个胰岛，胰岛直径大小为 (175±22)Ixm。GSIS结果发现胰岛素水平在低糖 (2．8mmol／L)和高糖 (16．7mmol／L)刺激下分 别为 (0．33±0．07)、 (1．36±0．47)ns／(islet·60rain)，高糖刺激的胰岛素水平是低糖刺激的 4．12倍 ，差异有统计学意义 (P0．05)。电镜证实胰岛B细胞胞膜、线粒体膜完整，胞内可见大小 不一的胰岛素分泌泡。结论 胆总管逆行灌注胶原酶消化小鼠胰腺，体外不连续密度梯度离心联合人 工挑取的方法是一种简便、快捷、稳定的小鼠胰岛分离方法，小鼠胰岛产量较高、形态完整 ，且GSIS 反应性 良好。 【关键词】 小鼠；胰岛；分离纯化；胰岛分泌 【中图分类号】R617 【文献标志码】A 【文章编号】1674-7445(2015)02—0009—05 Researchonisolationandpurificationmethodofpancreaticisletsinmice YahDien ，ZhouYingsheng， GaoXiuying，ZhaoYilTztn． InstituteofCardiovascularandPulmonaryVascularDiseaseinBejiing，Beijing 100o29．China Correspond ingauthor：ZhouYingsheng，Email：zhouysO1@sino．com A【bstract】 0bjeefive Toinvestigateamethodforisolationandpurificationofpancreaticisletsin mice，aimingtoenhancethequantityandactivityofpancreaticislets．M ethods Thepancreasweredigested byretrogradecommonbileductperfusionofcollagenase，discontinuousdensityrgadientcentrifugationandthe isletswere selected and purified by manualmethod． Afterovernightculture，the pancreatic islets were incubatedbystaticglucose—stimulatedinsulinsecretion (GSIS) andtheisletfunctionwasassessed．The subcellularstructureofisletBcellswasobservedundertransmissionelectronmicroscopy．Results Usingthe modifiedmethod，(200±20)isletswerecollectedineachmousewithameandiameterof(175±22) m． Theinsulinlevelsinthestimulationoflow (2．8mmol／L)andhighglucose(16．7mmol／L)were(0．33± 0．07)and (1．36．4-0．47)ng／(islet ‘60min)，whichweredetectedbyGSIS．Insulinlevelsin