标记嗜酸性粒细胞的组化染色方法.pdfVIP

维普资讯 464 ‘ 临床与实验病理学杂志 JClinExpPathol 2002Aug；18(4) 标记嗜酸性粒细胞的组化染色方法 张 勇 杨冬梅 张盛忠 刘红刚 (首都医科大学附属北京同仁 医院病理科 ，北京 100730) 嗜酸性粒细胞是炎性病变中较 常见的炎性细胞成分之 因为着色较深 ，双 叶核中性粒细胞与嗜酸性粒细胞不易区 一 ， 一 般认为其在变态反应性疾病的发病机制中发挥重要作 别 。 用 。但是嗜酸性粒细胞发挥作用的机制以及 与其它炎性细 3 讨论 胞作用的相互关系，近来出现争论。嗜酸性粒细胞胞质 中含 次级颗粒 ，颗粒 中主要有 4种碱性蛋 白：① 嗜酸性粒细胞 阳 carbolchromotrope2R染色方法可特异性地将嗜酸性粒 离子蛋 白，②主要碱性蛋白，③嗜酸性粒细胞衍生神经毒素 细胞染成粉红 色，较 HE染色更易准确 辨别嗜酸性粒 细胞 ， 和④嗜酸性粒细胞过氧化物酶。嗜酸性粒细胞一方面受其 显示组织中全部嗜酸性粒细胞的浸润状况 他细胞的影响，同时又对其它细胞产生影响。由于在某些疾 因为嗜酸性粒细胞经 carbolchromotrope2R染色的着色 病的发病机制中有着重要的作用 ，因而嗜酸性粒细胞成为当 效果好 ，与其他细胞 的反差明显 ，容易观察，如进行图像统计 今在某些领域里的研究热点之一。 分析 ，结果会 比较准确。 我们在研究嗜酸性粒细胞与鼻启、肉的关系中，应用针对 以往缺乏简便可靠 的活化嗜酸性粒细胞检测方法 嗜酸性粒细胞组织的carbolchromotrope2R组织化学染色方 1984年 ，Tai等 分别用嗜酸性粒细胞提取物和分泌产物致 法 ，取得满意的结果 ¨j，现介绍如下 。 敏小鼠，获得两种嗜酸性粒细胞特异性抗 体 EG1和 EG2，可 区分不同状态的嗜酸性粒细胞 。EG1对储 存型 (静止)和分 l 材料和方法 泌型 (活化)嗜酸性粒细胞呈阳性染色 ；EG2对活化嗜酸性粒 1．1 材料 32例病人的鼻息 肉组织标本 ，10％的中性福尔 细胞呈阳性染色。两者可用 于标记全部和活化嗜酸性粒细 马林液固定 2h，80％乙醇福尔马林 液固定 1h，95％乙醇过 胞。尽管有研究者对用 EG2做为活化嗜酸性粒细胞检测指 夜 ，100％无水乙醇两次各 1h，二 甲苯 3次各 30min，浸蜡 3 标的可靠性表示怀疑 3【j，但 目前 EG2仍为国际上应用最广 次各 30min，石蜡包埋 ，组织切片厚 4脚 备用 。另设染色切 泛的活化嗜酸性粒细胞标志性抗体 ，而 国内尚未见应用研究 片作为对照。 报道。组织特殊染色较免疫组化染色简便易行 ，适合临床应 1．2 试剂及配制 苯酚 1g、carbolchromotrope2R1g、蒸馏 用 ，采用对嗜酸性粒细胞特异 的染料 carbolchromotrope2R 水 lO0ml。先将 1g苯酚溶解于 100ml蒸馏水中，然后再用 进行染色，可做为嗜酸性粒细胞的识别标志 此液溶解 1gcarbolchromotrope2R即可。 此方法已应用于引起变态反应的各种疾病 ，如过敏性鼻 1．3 染色方法 切片脱蜡 ，乙醇梯度至水 ，用微波炉处理 5