表面活性剂在免疫组化中的应用.pdfVIP

维普资讯 临床与 实验病理 竽杂志 JClinF=cpPathol 2003Dec；19(6) ·665 · 表面活性剂在免疫组化 中的应用 丁 伟 高晓彬 【关键词】 表面活性剂 ；免疫组织化学 液稀释一抗与用 TBS稀释抗体相 比，细胞核表达 的抗原 阳 【中图分类号】 R98 【文献标识码1 B 性率增加 (图 1，2)，而细胞膜 、细胞质表达 的抗体 阳性增强 【文章编号 】 1001—7399(2003)06—0665—01 不明显。用 Tris-HCl缓冲液 950ml+TritonX-100(5m1)混 合液作为缓冲液 ，非特异性着色浅 ，背景清晰。而且经 Tris— 组织经福尔马林 固定 ，大量抗原决定簇被封闭，为了获 HC1缓冲液950ml+TritonX-100(5m1)混合液洗涤后 ，在加 得满意的结果 ，常用的方法是对组织切片进行抗原修复。而 抗体和S-P试剂盒时，试剂 自然 向外伸展。用pH6．0柠檬酸 表面活性剂 Tween-20和 TritonX-100的合理应 用，则 可以 缓冲液作为修 复液结果明显高于 pH6．0柠檬酸缓冲液 950 提高免疫组化染色的阳性率以及背景的清晰度 。 ml+Triumx 1O0(5m1)混合液作为抗原修复液 1 材料与方法 1．1 标本 收集本院手术切除的淋 巴瘤 、乳腺癌 、肠癌等标 本 10例 ，所有组织均用 10％福尔马林液 固定 ，常规 石蜡包 埋 ，3a／n厚连续切片 ，每个指标切 6张。 1．2 试剂 ER、PR、CIN5、CD20、CIN5RO、Syn、nm23、Ki一 67、TopII、p53、PCNA等抗体和 S-P试剂盒购 自福州迈新生 物技术开发有限公 司，Tween-20购 自温州清明化 工厂，Tri— tonX-100购 自温州东升化学试剂厂。 1．3 方法 抗体稀释：用 pH7．2Tris-HC1缓冲液 (95m1)+ Tween-20(5m1)、Tris-HC1缓冲液 950ml+TritonX100(5 图 1 IK5稀释抗 体 ，p53住乳腺癌 中表达 。 l’ 200 m1)2种液体和 pH7．2TrisHC1缓冲液作为抗体稀释液。抗 图2 TBS+TritonX100混合液稀释抗体，p53在乳腺癌中 体稀释 比为 ER1：400、PR1：500、CIN51：600、CD45RO 1： 表达 。S-P×200 600、∞ 20 1：600、Syn 1：200、NM231：600、p53 1：200、Ki一67 1：600、TOP—II1：400、PCNA1：1000。实验步骤 ：每例病例 分4组 ，切片常规脱蜡至水 ，3％ H202阻断 内源性过 氧化物 3 讨论 酶20min，高压锅抗原修 复，分别滴加用 3种不 同稀释液配 Tween-20全名 为聚氧 乙烯 (20)山梨糖醇 酐单 月桂 酸 制的抗体和 1张空 白TBS作阴性对 照各 30min，pH7．2 酯，而 TritonX一100全名 为聚乙二醇辛基苯基醚 ，两者均为 Tris-HC1缓 冲液 洗 3次。滴 加 二抗 ，37℃ ，30min，pH7．2 黄色黏稠液体 ，是一种表面活性剂 ，能溶解脂质 ，增加细胞通 Tris-HC1缓冲液洗 3次。滴加 S-P复合物 ，37℃，30min。 透性 ，有利于抗体渗入到细胞核内，使核表达的阳性细胞数 pt-I7．2Tris-HC1缓冲液洗 3次。DAB显色 ，脱水 、透 明、封