石蜡切片免疫荧光染色在肾脏病理诊断中的应用.pdfVIP

维普资讯 · 230 · 临床与实验病理学杂志 JClinExpPathol 2006Apr；22(2) 石蜡切片免疫荧光染色在 肾脏病理诊断中的应用 许向青，彭佑铭，刘映红，夏运成，姜文玲 关键词：石蜡切片；冷冻切片；免疫荧光；肾疾病 ／病理学 表1 石蜡切片与冷冻切片荧光染色结果比较 中图分类号：R446．8；R692 文献标识码：B 文章编号：1001—7399(2006)02—0230—01 我们应用石蜡切片免疫荧光染色法，对肾活检组织进行 免疫荧光染色，取得了较好的效果，现报道如下。 1 材料与方法 3 讨论 1．1 材料 选用中南大学湘雅二医院肾脏病研究所肾活检 标本35例，其 中狼疮性 肾炎 (LN)10例 ，乙肝相关性 肾炎 目前，由于肾活检技术的 日益完善 ，肾活检组织的取材 (HBVGN)5例，IgA肾病 (IgAGN)10例，膜性肾病 (MN)5 一 般都较满意。但有时因为操作者的技术水平或 B超定位 例，肾小球轻微病变(GML)5例。所有标本均进行冷冻切片 的偏差及个别患者肾脏结构的异常等因素而造成取材不理 和石蜡切片免疫荧光染色。制作石蜡切片的组织用 10％中 想，不能同时做冷冻切片和石蜡切片，这样就会造成不能全 性福尔马林于4℃冰箱固定 12h，常规脱水浸蜡。但浸蜡时 面地衡量器官的病变情况。在肾脏疾病的病理诊断中，多一 间不宜超过 4h，温度严格控制在 55—60℃。 些肾小球就有可能改变诊断，而有些肾脏疾病，必须依据冷 FITC标记的兔抗人 IgA、IgG、IgM、C1q、C3、Fib，均为丹 冻切片的结果，如 IgM 肾病、IsA肾病、C1q肾病和 HBVGN。 麦Dako试剂。胰蛋 白酶试剂盒 由福州迈新公司提供。 在增生硬化性肾炎或肾病和局灶节段肾小球硬化症 (~SGS) 1．2 方法 连续厚4I．Lm切片，切片后置 55～60℃恒温烤 中，如果只切到硬化的肾小球，荧光染色结果可能是阴性，只 箱，烤片时间40min，烤片时间过长易造成抗原的破坏而导 有切到病变的肾小球，其荧光才为团块状沉积。 致结果的误差 ．2J，后入氯仿脱蜡至水洗。我们用氯仿代替 冷冻切片能很好地保存抗原 J。我们曾尝试用冷冻切 二 甲苯，是因为它们同为石蜡的良好溶剂，但氯仿能使组织 片后的余下组织再经固定制成石蜡切片，但因肾组织的石蜡 不发生收缩 J，且二甲苯易经呼吸道吸入而致血液和神经系 切片厚度为 1—2 m，因此，该方法使切片难度增大，而且组 统损伤，水洗后入pH7．2的PBS液 1min，拭干周围液体后 织染色效果也不理想。石蜡切片经过固定、脱水、浸蜡，使不 入温盒加胰蛋白酶消化液，37℃恒温水箱中30min，pH7．2 少抗原簇被封闭 ，因此，最大限度地保存抗原是本方法 PBS洗 3遍，拭干后分~JUJn入 1：20稀释的FITC标记的兔 成败的关键之一。在我们的结果中，石蜡切片与冷冻切片相 抗人 IsA、IgG、IgM、C1q、C3、Fib荧光抗体 (冷冻切片可用稀 比，少量抗原(+)难以检出，但对肾脏疾病的诊断没有大 释至 1：40的抗体)，37℃恒温水箱中30min，pH7．2PBS 的影响。我们在实际操作中，发现肾小管容易出现非特异性 洗3遍，滴加缓冲甘油封固，荧光镜下观察结果。 染色，这可能与肾小管的构成有关。 根据我们的经验 ，用石蜡切片做免疫荧光染色，应注意 2 结果 以下几点 ：(1)固定要在4℃冰箱中；(2)烤片时间控制在40 石蜡切片LN为 “满堂亮”，块状或线状沉积于肾小球的 min内，温度不能超过60℃；(3)抗体稀释度用说明书标示 系膜区和毛细血管袢，荧光强