套式聚合酶链反应法检测外周血单个核细胞中HBV cccDNA.pdfVIP

中国卫生检验杂志2008年 11月 第 l8卷 第 11期 ChineseJoumalofHealthLaboratoryTechnology，Nov2008；Voll8 No11 2317 【临床检验】 套式聚合酶链反应法检测外周血单个核细胞中HBVcccDNA 郑守虎 ，董庆鸣 (1．南京军区杭州疗养院一科 ，杭州 310007；2．北京地坛医院传染病研究所，北京100013) [摘要] 目的：建立套式聚合酶链反应法(nPCR)检测慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中乙型肝炎病毒共 价闭合环状DNA(HBVcccDNA)。方法：根据HBV基因组DNA正负链上下游缺口序列 ，设计两套相对保守的引物，建立 HBVcccDNA套式PCR，并用该法检测200例慢性乙型肝炎患者PBMC中HBVcccDNA。结果：该法检测200例慢性乙型 肝炎患者 ，HBVcccDNA阳性率为60％。结论：套式PCR法简便、灵敏，可用于测定PBMC中HBVcceDNA。 [关键词] 乙型肝炎病毒 ；套式聚合酶链反应法；共价闭合环状DNA(cccDNA)；慢性 乙型肝炎 [中图分类号] R373．2’l [文献标识码] B [文章编号】 1004—8685(2008)11—2317—02 EstablishmentOfanestedpolymerasechainreaction fordetectionofHBV cccDNA inpe· ripheralbloodmononuclearcells ZhengShou．hu。 ， DongQing—ming (1．NanjingMilitaryRegionHangzhouSanatorium ofPLA，Hangzhou310007，China；2．BeijingDetanHospital，Beijing 100013，China) [Abstract] Objective：ToestablishanestedpolymerasechainreactionfordetectionofHBVcccDNAinperipheralbloodmono— nuclearcells．Methods：Anestedpolymerasechainreaction(nPCR)ofrdetectionofHBVcccDNAinperipheralbloodmononu· clearcellswasestablishedusingtwopairsofrelativelyconservativeprimersdesignedaccordingtothesequencesbetweenthegap ofupstream anddownstream ofplusandminusstrandofHBVviral genomicDNA．Results：Of200patientswithchronichepatitis B，120(60％)wereHBVcccDNApositivebythenPCR．Conclusion：ThenPCRissimpleandrelativelysensitiveandcanbe usedofrdetectionofHBV CCCDNA inPBMC． [Keywords] HepatitisBvirus；Nestedpolymerasechainreaction；CovalenflyclosedcircularDNA(cccDNA)；Chronichepa— titisB 乙型肝炎病毒 (HBV)共价 闭合环状 DNA(covalenfly 住院的慢性乙型肝炎患者血清标本共计200份，应用荧光定量 closedcirculraDNA，cccDNA)是HBV基因组复制中间体 mR— 聚合酶链反应法(FQ—PCR)检测患者血清 HBVDNA的滴度 NA和前基 因组 RNA 的合成模板 ，是 HBV持续感染 的关 为 10～1O拷贝／H