丽春红G用于人血清样品中总蛋白共振光散射测定.pdfVIP

( ) 第 31 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 　研究报告 第 2 期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2003 年 2 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 148～152 丽春红 G 用于人血清样品中总蛋白的共振光散射测定 杨传孝　李原芳　黄承志 (西南师范大学环境化学研究所 ,重庆 400715) ( ) ( ) ( ) ( ) 摘 　要 　在酸性介质中 ,丽春红 G Ponceau G, PG 与牛血清白蛋白 BSA 、人血清白蛋白 HSA 、溶菌酶 Lys γ (γ ) ( ) 及 球蛋白 IgG 等蛋白质作用产生共振光散射 RLS 增强信号 ,最大散射峰位于288 nm 处。在最佳酸度和 γ 离子强度下 ,增强 RLS 强度在 288 nm 处与蛋白质的浓度呈线性关系 ,用于测定 BSA 、HSA 、Lys 、IgG 的检出限 均在 25 μ gL 以下。本方法成功地应用于合成样和人血清样品的测定, 测量结果与考马斯亮蓝法一致。 关键词 　共振光散射 ,丽春红 G,蛋白质 1 　引　　言 共振光散射技术研究是目前超分子化学及其分析应用研究中比较活跃的课题之一1 ,2 。应用该技 术已建立了测定核酸3 ,4 和蛋白质5 ～7 的分析方法 ,表征了分子聚集的光谱特征8 ,9 和核酸的超螺旋结 构8 。目前该技术已用于痕量金属离子10 、表面活性剂11 的测定。研究表明:增强 RLS 信号与蛋白质 的分子量大小和电性有关6 。在静电作用为主的体系中 ,当溶液的pH 小于蛋白质的等电点时 ,蛋白质 带正电荷。阴离子染料与蛋白质之间通过静电作用形成蛋白质染料的复合物 ,亦即染料在蛋白质上堆 积形成较大的粒子 ,因而产生强烈的 RLS 增强信号。与静电作用相比 , 电荷偶合产生的 RLS 增强就复 杂得多 ,但在以电荷偶合为主要作用的环境条件下 ,会出现 RLS 响应与蛋白质分子量成正比的情况6 。 丽春红 G 是一种组织学对比染料 ,含有两个磺酸基 , 弱酸条件下带负电荷 ,因而易与带正电荷的大分子 作用。 2 　实验部分 2. 1 　仪器与试剂 ( ) ( ) F2500 荧光分光光度计 日本日立公司 ,UV8500 紫外分光光度计 香港天美公司 ,MVS1 旋涡混 ( ) ( ) 合器 北京北德科学仪器有限公司 ,PHS3C 酸度计 上海大中分析仪器厂 。 ( ) ( ) ( 牛血清白蛋白 BSA