金属β内-酰胺酶测定影响因素探讨.pdfVIP

论文交流·微生物诊断 我们在试验中发现由于EDTA本身的抑菌作用，可在纸片周围形成抑菌环，不同程度的干扰MBL的 测定。为了消除这种干扰，笔者分别用在空白纸片上加0．5M浓度的EDTA 片之间所产生的协同现象明显，虽然加1斗l时EDTA本身不产生抑菌环，但不足以产生协同现象。因此我 0．5M浓度的EDTA作为试验的最佳浓度，即本身既不出现抑菌环且又能产生协同现象，以 们选择加21xl 便提高检出MBL的可靠性。 为了观察EDTA对其他不同细菌的抑制作用，我们分别选择了大肠艾希菌、铜绿假单胞菌、鲍漫不动 杆菌、阴沟肠杆菌各10株进行EDTA的抑菌观察，发现加0．5M的EDTA5¨l以上均能见到抑菌环的存 在，结果证明EDTA本身的确存在着不同的抑菌作用，尤其在大浓度下更是如此。 纸片协同法和纸片增效法的比较：由于EDTA存在着一定的抑菌作用，以及不同抗生素本身未知的抑 菌环，采用纸片增效法有时对某一结果很难做出明确的判断，而纸片协同法主要是观察有无产生协同现 象，结果易于判断，较为方便可靠。本文观察的20株产金属酶菌株，纸片增效法为16／20，纸片协同法 为20／20。 目前由金属p内一酰胺酶(MBL)引起的碳青霉烯类抗生素耐药的细菌分离率在不断增多，并在不同 的细菌中检出¨_5J。由于金属酶引起的耐药较为严重，已成为人们研究的热点，因此快速筛查产MBL菌 株可有效的控制感染和防止耐药菌的传播，虽然聚合酶链技术较为准确，但方法较为繁杂，不便于普及 开展。目前国内外报道较多的是EDTA协同试验进行金属p内-酰胺酶的测定，该方法较为简便，但我们 在应用中发现易受诸多因素的影响。本文着重对有关影响因素进行探讨，现将结果报道如下。 一、材料与方法 1、试验菌株；本试验产MBL菌株均系我院微生物实验室临床分离菌株，全部对亚胺培南、头孢他 啶、头孢吡肟及其他三代头孢菌素类耐药，其中嗜麦芽窄食单胞菌15株，铜绿假单胞菌5株。 30txg)等药敏纸片购与中国药品生物制品鉴定所。 3、培养基：MH琼脂购于杭州天和微生物试剂有限公司。 4、纸片增效法：将IPM、CAZ、FEP各2片分别贴于同一MH琼脂平板左右两侧，间隔2CM，在其 EDTA 中一侧加0．5M 2斗l，然后放35。(2温箱中温育18—24小时观察结果，分别测量左右两侧三种药敏纸 5斗l，1IxlEDTA进行观察。 片，平板一边另贴一空白纸片，在两张空白纸片上加21xl 察结果，在EDTA与三种抗生素任一抗生素纸片之间出现协同现象(即出现“坑”)为MBL阳性菌株。 EDTA进行观察。 ． 采取同样方法分别加15斗l，101xl，51xl，1Ixl 二、结果 不同EDTA量对结果的影响：加21xl和1斗l 仅避免了EDTA本身所产生的抑菌环的影响，而且可以产生明显的协同现象件(图3—4)。 520 论文交流·微生物诊断 三、讨论 目前由MBL引起的多重耐药日趋严重，已在不同的细菌中检出并报道¨_7。，给临床治疗该菌引起的 感染带来很大的困难，这类MBL可不被克拉维酸、舒巴坦和三唑巴坦所抑制¨1，可对B一内酰胺酶类抗生 素包括青霉素类、头孢菌素类、以及碳青酶烯类抗生素等具有广泛的水解作用并产生耐药，因此快速筛 查产MBL菌株可有效的控制感染和防止耐药菌的传播。MBL的主要特征是酶的活性中心结合了二价金属 制，因此利用EDTA对金属B·内酰胺酶的抑制作用以鉴别其他类型的p内一酰胺酶¨’21，通过这些酶抑制 方法的应用比较，即EDTA纸片增效试验和EDTA纸片协同试验。 “坑”)，而高浓度EDTA本身所产生的抑菌环很容易和所产生的协同现象融合到一起，从而影响结果的判 断，甚至容易引起假阳性结果。笔者在试验中也发现由于EDTA本身的抑菌作用，可在纸片周围形成抑 —15mm，加15 环基本消失，但和周围药敏纸片之间所产生的协同现象明显(图3、4)，虽然加1Ixl时EDTA本身不产生 抑菌环，但不足以产生协同现象(图1)。因此我们选择加2斗l0．5M