VPS36和CKAP2在鸡卵泡内和表达及DNA甲基化的分析.pdfVIP

ANIMAL 2012，VOLUMEl3，NO．1BIOTECHNOLOGYBULLETIN 15 VPS36和CKAP2在鸡卵泡内的表达及DNA甲基化分析 崔新星1，康丽1，朱桂玉“2，姜运良H (1．山东农业大学动物科技学院，山东泰安，271018： 2．泰山学院生物科学与技术系，山东泰安，2710181 引言 动子。VPS36作为空泡蛋白分选蛋白家族的一种泛素结合蛋白，在泛素化内吞受体进入 溶酶体降解的通路中发挥重要的生物学作用。研究表明，随着母鸡的性成熟，VPS36在 卵巢内的表达下调。CKAP2编码的蛋白是～种和有丝分裂密切关系的调节因子，受细胞 周期的调控；人类恶性肿瘤中CKAP2的表达上调。本研究测定了上述两个基因在160日龄 母鸡各级卵泡内的相对表达量，检测了两个不同时期卵泡VPS36和CKAP2的甲基化水平 并探讨了二者的关系。 材料与方法 23wkl刍来航母鸡4只，宰杀后，分离卵巢和各级卵泡组织。提取各级卵泡的总 Fl和小白泡两个时期的组织，提取基因组，然后对基因组进行亚硫酸氢盐处理，PCR扩 增两个基因启动子区和部分基因体区，PCR产物克隆测序，检测两个级别的卵泡内两个 基因的甲基化水平。 结果 实验结果表明：Vps36的表达水平从小白泡、小黄泡、F6、F4、F2、至IJFl总体表现 出降低的趋势，其中小白泡和其他各级卵泡相比差异显著。Ckap2的表达水平从小白泡、 小黄泡、F6、F4、F2、至lJFl总体上表现出降低的趋势，其中小白泡(A)，小黄泡和 F6(B)，F4、F2和F1(c)三组之间差异显著，组内无显著差异。从结果可以看出两个基因 在卵泡中的总体表达趋势是一致的。Vps36和Ckap2启动区有32个CpG位点。亚硫酸氢盐 测序结果显示，小白泡和F1两种组织中Vps36和Ckap2启动子区所有的CpG／i立点都是未甲 基化的，两种组织基因组相同区域甲基化水平没有差异。本实验所检测的Ckap2和 Vps36基因体区域分别包含24个和33个CpG位点，小白泡和F1基因组基因体区域甲基化总 体水平没有差异。基因体区域和启动子区相比，甲基化水平有一些差异，基因体区存在 位于所检测片段的末端，远离转录起始位点的方向。 讨论与结论 研究结果表明VPS36随着卵泡发育表达下调，特别是等级化前后的差异明显，而等 级卵泡之间的差异不显著。有意思的是与VPS36头对头的基因CKAP2也表现出类似的趋 势，甚至它在卵泡之间的差异更加显著。这些结果表明VPS36和CKAP2是与卵泡发育和 选择关系密切的两个基因。研究表明DNA甲基化在基因组织特异性表达中发挥重要作 用，本研究检测了VPS36和CKAP2基因组的甲基化水平，发现等级前后两种卵泡的甲基 化水平没有差异，仍然是一种促使基因活跃转录的状态。这些结果表明VPS36和 CKAP2在等级卵泡内的下调不是DNA甲基化引起的，导致两个基因在等级卵泡内的表达 下调的机制还有待于进一步研究。 关键词：卵泡等级化；基因表达：甲基化；VPS36：CKAP2 致谢：本研究得到国家自然科学基金资助 木通讯作者。