MALDI-TOF-MS法测定中国汉族人群CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP3A4与CYPIA2基因座上50个SNP位点.pdfVIP

2011 ——342—— q-=-t-鉴定理论与实践研讨呜}论文毒- M 座kso个SNP位点★ 施妍1。2向平2李莉2沈敏2+ (1．苏州大学基础医学与生物科学学院法医学系，江苏苏州215123； 2．司法部司法鉴定科学技术研究所上海市法医学重点实验室，上海200063) 【摘要】通过基因型分析区分不同的药物代谢类型，从而在法医学中解释药物中毒足未来毒药物分析的趋势。测定单核 了大部分的药物代谢，本研究选取这些基因座上的50个SNP位点，通过复合PCR和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 DNA样品作为质量控制样品，运用MassARRAY Assayi艮计引物，通过复合PCR扩增含SNP位点的片段，经单碱幕延伸、 具有多态性，其中8个位点的分布频率在巾国汉族人群和高加索人群中存在显著性差异(P0．01)，2个位点的分布频率和现 检测结果可信且适用于高通量的基因分型研究。 【关键词】ShIP；复合PCR：MALDI．TOF-MS；等位基肉频率 1 引文 不同个体对药物反应具有差异，因此解释药物中毒死亡一直是法庭科学领域的重点和难点。造成这种个 体差异的原因，一部分可能是环境因素、身体状况、或者药物与药物之间的相互作用，但在大多数情况下， 这种差异是来自于个体遗传因素，由不同的药物代谢酶(drug-metabolizingenzymes，DMEs)介导。其中细 胞色素P450(cvv)就是一种重要的DMEs，它具有高度基因多态性，因此会引起个体对药物的反应差异， 从而导致不同的药物副作用，严重者甚至引起死亡【I-21。 研究发现，CYPI、CYP2和CYP3家族参与了78％以上的药物代谢，其中贡献最大的5种酶为： 从而区分代谢类型。因此SNPs检测在法医毒物学领域中具有潜在的应用价值14-51。近几年，基质辅助激光解 laser mass 析电离飞行时间质谱(matrix-assisted time-of-flight desorption／ionization MS)技术由于其高准确度、高灵敏度、高通量、低成本等优势而被越来越多的用于SNPs的检测分析上睁明。 基因座上降121，尚缺乏其它重要基因座上SNPs的相关信息以及中国汉族人群SNPs分布的基础数据。因此， 基因座上50个SNP位点在中国汉族人群中的等位基因分布频率，在国内首次针对中国汉族人群CYP基岗座 上的多个SNP位点进行了大规模筛查分析。 【基金项目】：本研究由国家自然科学基金(No和科研院所公益基金(No．GY0903)资助 ’通讯作者 onForensioandProct：Ice —·343—— symposium Theory 2材料与方法 2．1 选择SNP位点与引物设计 Inc．)设计了50组特异性引物。每组包括3条引物，分别为一对PCR引物和一条单碱基延伸引物。引物由上 海生工合成。 2．2 DNA抽提 采集无关健康中国汉族人血样200份。参照基因组DNA提取试剂盒(上海生工)操作步骤，全血用量0．5mL， 最终洗脱体积30止。抽提的基因组DNA用紫外分光光度法定量，DNA浓度为20-30n妫止。 2．3复合PCR PCR程序如下：940(；15min，然后45 列中包含一个5’端的加尾(5。．ACGTTGGATG)，用以平衡GC比例[1310 个循环(94℃20s，56℃30S，72℃lrain)，最后72℃3min。扩增产物4℃保存。 2．4 SAP酶去磷酸化 alkaline phosphatase，SAP)去除多余未反应的