鲁米诺-H2O2体系流动注射-化学发光增强法测定胰蛋白酶.pdfVIP

维普资讯 第28卷第 3期 淮北煤炭师范学院学报(自然科学版) Vo1．28 No．3 2007年 9月 JournalofHuaibeiCoalIndustryTeachersCollege(NaturalScience) Sep．2007 鲁米诺 一H2O2体系流动注射 一化学 发光增强法测定胰蛋白酶 赵丹华，陆万平，张国平，訾言勤 (淮北煤炭师范学院化学系，安徽 淮北 235000) 摘 要：在碱性条件下，胰蛋 白酶对鲁米诺 一过氧化氢体系的化学发光体系具有显著的增强作用，据此建立了流动注 射 一化学发光增强法测定胰蛋 白酶的新方法．该法简单、快速、线性范围宽，在优化的实验条件下，测定胰蛋 白酶在 1．0～50．0mg／L的浓度范围内相对发光强度与其浓度呈 良好的线性关系，检出限可达0．26mg／L，对浓度为 10．0 mg／L的胰蛋白酶进行平行测定其相对标准偏差 (RSD)为 0．7％(n=11)，成功地用于合成样品中胰蛋 白酶的测定，回 收率在 90．1％ 104．1％，结果令人满意． 关键词：鲁米诺；胰蛋白酶；流动注射；化学发光增强 中图分类号：O629．8 文献标识码 ：A 文章编号：1672—7177(2007)03—0031—04 胰蛋 白酶 (trypsin)是人和动物肠道 中一种重要的蛋白水解酶，含有 229个氨基酸残基，有 5个二硫键， 分子量 24000，空间结构呈 “口袋型”，活性中心存在保守的His、Asp和 Ser活性三联体．在酒类、饮料的澄 清，畜血蛋白质的水解，胰蛋白胨制备，皮革加工和生丝处理等方面显示了广泛的应用前景n】．该酶被发现以 来，人们对其进行了大量研究．关于胰蛋白酶的定量分析不仅在化学、生物中倍受关注，同时也是医药、生命 科学等其它学科研究的重点和热点．常见的分析方法有紫外分光光度法、可见分光光度法、速率散射比浊法 和共振光散射法 】．可见，光化学分析方法是定量测定胰蛋白酶的常用方法，对胰蛋白酶含量的测定丰富了 生物大分子含量测定的内容．目前，利用流动注射 一化学发光测定胰蛋白酶的文章并不多，可查的仅有訾言 勤3【采用高锰酸钾 一啶橙体系研究过，但该体系与本文体系相比不仅线性范围窄，而且灵敏度低． 化学发光法 以其操作简便、线性范围宽和灵敏度高而广泛地应用于分析 中¨．7]．但 由于化学发光 (chemiluminescence，CL)现象一般比较短暂且随时间变化较大，在使用间歇式手工操作时较难取得 良好精 度，流动注射 (FIA)系统很好地适用于这类反应伯一1．因为FI—CL分析不仅保存了一般CL法的优点而且具 备FIA的一般优点 l 1)和一般 CL分析一样，FI—CL分析所用的分析装置 比较简单，无需复杂的分光元件和光强测量装置． 2)方法的灵敏度高，一般在ng／g数量级，比光度分析低 3到4个数量级． 3)线性范围宽．反应物的发光强度与待测物的浓度可在 4～5个数量级范围内成线性关系． 本文详细研究了胰蛋 白酶对 Luminol—HzO：化学发光体系的影响，建立了一种流动注射化学发光增强 法测定胰蛋 白酶的新方法．该法用于合成样 品的测定，结果令人满意． 1 实验部分 1．1 仪器及试剂 IFFL—D型流动注射化学发光仪 (西安瑞科 电子有限公司)，流路见图 1，pH一3C型酸度计 (上海雷磁仪 器厂)． 鲁米诺 (Lumino1)储备液 (1×10 mol／L)：称取鲁米诺 (Fluka，瑞士)0．1772g加 0．1mol／LNaOH溶 收稿 日期：2007—04—2O 基金项 目：安徽省教育厅资助项 目(2006jql139) 作者简介：赵丹华 (1978一 )，女，安徽萧县人，讲师，硕士，研究方向：发光分析 维普资讯 32 淮北煤炭师范学院学报 (自然科学版) 2007年 解，并定容至 1