HIV-1糖蛋白gp120激发人小胶质细胞钙内流效应和ERK磷酸化.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2008，24(12)：2439—2444 · 2439 · [文章编号] 1000—4718(2008)12—2439—06 HIV一1糖蛋 白gpl20激发人小胶质细胞钙 内流效应和 ERK磷酸化 黄秀艳， 曾耀英 (暨南大学组织移植与免疫研究中心，广东 广州 510632) [摘 要] 目的：探讨HIV一1糖蛋白gpl20对人小胶质细胞钙离子内流和ERK磷酸化的作用及其机制。方 法：用钙离子探针Fho-4标记粘附在盖玻片上的人小胶质细胞 ，运用共聚焦显微镜 以荧光强度为指标实时观察 各种条件下的细胞内钙离子水平的变化；用gpl20处理并用 anti—gpl20一FITC进行染色，运用共聚焦显微镜术和 流式细胞术分析人小胶质细胞与gpl20结合情况 ；用抗磷酸化ERK抗体免疫荧光方法进行染色，运用共聚焦显微 镜术和流式细胞术进行 ERK磷酸化水平分析。结果：共聚焦显微镜检测结果显示 HIV—l糖蛋白gpl20能够激发 人小胶质细胞钙离子内流效应；共聚焦显微镜和流式细胞仪分析结果显示 gpl20可以与人小胶质细胞结合；共聚 焦显微镜和流式细胞仪分析结果显示gpl20刺激可增加人小胶质细胞 ERK磷酸化。结论：HIV一1糖蛋白gpl20 能在人小胶质细胞激发钙离子内流并且增加胞内ERK的磷酸化 ，从而导致了小胶质细胞的活化，这一效应提示 ， 在HIV—l相关性脑炎中，gpl20可能参与了某些发病机制。 [关键词] 人小胶质细胞；HIV一1糖蛋白gpl20；钙离子内流 [中图分类号】 R392．32 [文献标识码] A Calcium —influxresponseandERK ph0sph0rylati0n inhumanmicroglia triggeredbyHⅣ 一1glycoproteingpl20 HUANG Xiu—yan．ZENG Yao—ying (InstitmeforT~sueTransplantationandImmunology，JinanUniversity，Guangzhou510632，China．E—mail：tzenygy@ jnu．edu．cn) [ABSTRACT] AIM：TheaimofthepresentstudyistoexploretheeffectsandmechanismsofHIV一1glycopro- teingpl20oncalcium—influxandERK—phosphorylationofhumanmicroglia．METHODS：Thelevelofintracellularcal- cium ofhumna microgliagrownoncoverslip，whichwasloadedbycalcium —probe，Fluo一4，andthentreatedinvarious experimentalprocessing，Was detectedbyconfocalmicroscopywithtimeresolutionmode．Thebindingofgpl20tohumna mierogliaWas determinedwithconfocal microscopyorflow cytometryaftertreatmentwithgpl20 nad stainedwithanti— gpl20一FITCantibody．Phosphorylation ofERK withinhttmanmicrogliawithorwithoutgpl20stimulationWas naalyzed withconfocal microscopyfollowingthedirectimmuno—stainingwithanti—phosphorylatedERKna tibody．RESULTS：Th e res