启动子区域甲基化状态对THP-1细胞肿瘤坏死因子α分泌的影响.pdfVIP

· 1206· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2011，27(6)：1206—1209 [文章编号] 1000—4718(2011)06—1206—04 启动子区域 甲基化状态对 THP一1 细胞肿瘤坏死因子 0分【泌的影响 郭 尧， 杨智勇， 王春友 (华中科技大学同济医学院附属协和医院胰腺病研究所，湖北 武汉430022) [摘 要] 目的：探讨肿瘤坏死因子仪(7YvF— )基因启动子区域散在CpG双核苷酸结构甲基化状态对蛋白 分泌和基因表达的影响。方法：检测人单核细胞系THP一1细胞在脂多糖 (LPS)刺激状态下，不同时点TNF—ot的 表达和其基因启动子区域的甲基化状态。采用ELISA法测定细胞培养液上清TNF—ot水平；采用重亚硫酸盐转化 基因测序法测定 DNA甲基化状态。结果 ：受到LPS刺激后 ，THP一1细胞迅速产生 F— ，在4h达到高峰后快 速下降。州F— 基因启动子一344bp到转录起始位点(TSS)区域内，存在 11个散在CpG双核苷酸结构。未受到 LPS刺激时均处于甲基化状态；刺激4h后，有4个处于甲基化状态；刺激8h后， 9个处于甲基化状态。未刺激 与刺激4h之间，刺激4h与刺激8h之间，甲基化率比较均有显著差异(P0．01，P0．05)。结论：未受到LPS刺 激时，THP一1细胞 刑F—o／基因启动子区域甲基化水平较高；LPS刺激后，其该区域甲基化水平降低。该变化与 TNF—ot表达分泌相关。 [关键词] 肿瘤坏死因子 ；DNA甲基化；脂多糖类；THP一1细胞 [中图分类号] R363 [文献标识码】 A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．06．029 Effectsofmethylationstatusofgenepromoteronsecretion0ftumornec- rosisfactoralphainTHP—-1cells GUO Yao．YANG Zhi—yong，WANG Chun—you (PancreaticDiseaseInstitute，UnionHospital，TongfiMedcialCollege，HuazhongUnivenity ScienceandTechnology，Wu— han430022．China．E—mail：chunyouwang52@126．corn) [ABSTRACT] AIM ：Toinvestigatethecorrelationbetweentheexpressionandsecretionoftumornecrosisfactor alpha(刀VF—o／)andthemethylationstatusofTNF一 promoter．METHODS：ThesecretionlevelofTNF—oLinTHP一 1cellsstimulatedwithlipopolysaccharide(LPS)fordifferenttimewasexaminedbyenzyme—linkedimmunosorbentassay (ELISA)．Themethylationstatusof蜊F一 promoterwasmeasuredwithbisulfitesequencinganalysis．RESULTS：In unstimulatedTHP一1cells．thesecretionlevelofTNF—dwasverylow，andallthe11CpGdinucleotidesingenepromoter rangingfrom 一344 bptotranscriptionstartsite(TSS)werecompletelymethylated．In4hLPS—stimulatedTHP一1 cells．thesecretionlevelofTNF一 reachedpeakconcentration，whileCpG dinucleotidesingenepromoterwereextensive—