噬菌体肽库与NCI—H1299细胞筛选肺癌特异性结合多肽ZS-9的初步研究.pdfVIP

· 868 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(5)：868—872 [文章编号] 1000-4718(2009)05-0868—05 噬菌体肽库与NCI—H1299细胞筛选肺癌 特异性结合多肽 ZS一9的初步研究 王军业 ， 石 磊 ， 戴淑琴 ’ ， 潘 琴。， 巫 玮。， 臧林泉弘， 戎铁华。， (华南肿瘤学国家重点实验室，中山大学肿瘤防治中心胸科，检验科，广东 广州510060； 广东药学院药科学院药理教研室 ，广东 广州 510006) [摘 要] 目的：利用噬菌体肽库与肺癌NCI—H1299细胞筛选出肺癌特异性结合的多肽，研究其亲和力和 特异性。方法：以肺癌细胞NCI—H1299为靶细胞，肺二倍体成纤维细胞MRC～5为吸附细胞，与噬菌体随机十二 肽库进行三轮筛选 ，挑取单克隆扩增并测序，进行生物信息学分析、比对；利用ELISA、细胞免疫化学、组织免疫化 学方法测定多肽的亲和力和特异性。结果：经过三轮减性筛选发现，随机挑选的9个单克隆中，其中 1个对 NCI—H1299和A549均具有较高亲和力，将其命名为 ZS一9，测序结果为CATAATAAGCATCTICCGTCTACG CAGCCTCTYGCG，根据测序结果推导出ZS一9的氨基酸序列HNKHLPSTQPLA，生物信息学分析表明ZS一9的氨 基酸序列与美国国立生物技术信息中心(NCBI)GenBankDNA序列数据库和Swiss—Prot蛋白数据库中的已知基 因和蛋白无同源性 ，表明我们筛选到一种新的肺癌相关抗原的配体。结论：利用噬菌体随机十二肽成功筛选出与 肺癌细胞NCI—H1299和A549具有较高亲和力的多肽ZS一9，为肺癌的早期诊断和靶向治疗奠定基础。 [关键词] 噬菌体肽库；肺肿瘤；NCI—H1299细胞；多肽ZS一9 [中图分类号] Q7，R73，R9 [文献标识码] A Screening oflungcancerspecificpeptideZS--9 from a phagedisplay peptidelibraryandNCI--H1299 cells WANGJun—ye ，SHILei，DAIShu—qin ，PANQin，WUWei。，ZANGLin— quan ．R0NGTie—hua’ (。SkateKeyLaboratoryofOneologyinSouthChina，Guangzhou510060，China；DepartmentofThoracicSurgery，Cancer Center，SUNYat—senUniversity，Guangzhou510060，China；DepartmentofPharmacology，GuangdongPharmaceutcial University，Guangzhou510006，China；Departmem ofLaboratoryMedciine，CancerCenter，SUN Yat—senUniversity， Guangzhou510060，China．E一．tail：zanglq@yahoo．con；rongth@sysucc．com) [ABSTRACT] AIM：ToobtainthepolypeptidesspecificallyboundtoNCI—H1299celllinefrompeptidelibraries andtoidentifythesepolypeptides’affinityand specifictolungcancer．METHODS：ThelungcnacerNCI—H1299cell linewasusedastheantigennadMRC—·5Was usedascontrolforsubtractionbiopanningfrom aphagedisplaypeptideli-· brary．Thepositiveandspecificbindingcloneswereidentifiedbycellenzyme—linkedimmunosorbentassay(ELISA)nad immun