细胞自噬对饥饿环境下椎间盘髓核细胞的保护作用.pdfVIP

· 1302 · ChineseJournalofPathophvsiologv 2012．28(7)：1302—1307 [文章编号] 1000-4718(2012)07—1302—06 细胞 自噬对饥饿环境下椎 间盘髓核细胞的保护作用 江立波， 张小磊，徐华梓△， 吴瑞凯， 杨光永， 吴 畏， 胡旭琪，郑旭浩 (温州医学院附属第二医院脊柱外科，浙江 温州32500o) [摘 要] 目的：探讨饥饿条件下椎间盘髓核细胞是否发生 自噬及自噬对髓核细胞的作用。方法：原代培养 sD大鼠髓核细胞 ，对细胞表型进行鉴定后，将细胞分为正常对照组、3一甲基腺嘌呤(3一methyldeenine，3一MA)加 DMEM培养基组、3一MA加EBSS培养基组和EBSS饥饿组，接着用单丹磺酰戊二胺(monodansylcadaverine，MDC) 染色、透射电镜和Westernblotting观察各组细胞的自噬差异，最后采用 CCK一8法测定细胞生长抑制率 以及 TUNEL法测定细胞凋亡率。结果：成功培养出sD大鼠髓核细胞。与对照组相比，电镜和荧光显微镜下观察到 EBS$培养基诱导的髓核细胞出现 自噬囊泡，但是3一MA抑制后细胞 自噬泡明显减少；Westernblotting检测发现 LC3一II／I~3一I和Beclin一1／3[一actin在EBSS处理组明显大于3一MA+EBSS处理组和对照组(P0．05)，而3 一 MA+EBSS处理组的细胞抑制率和凋亡率明显高于EBSS处理组(P0．05)。结论：饥饿可以诱导大鼠椎间盘 髓核细胞发生自噬，并且3一MA能抑制自噬发生。自噬对饥饿环境下的髓核细胞可能具有一定的保护作用。 [关键词] 髓核细胞；自噬；细胞凋亡；饥饿 [中图分类号】 R329．25 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2012．07．028 Protectiveeffectofautophagyonnucleuspulposuscellsunderstarvation JIANGLi—bo，ZHANGXiao—lei，XUHua—zi，WU R-ui—kai，YANGGuang—yong， WU Wei．HU Xu—qi．ZHENG XU—hao (DepartmentofSpineSurgery，theSecond罅 f8dHospitalofWenzhouMedicalCollege，Wendwu325000，China．E— mail：spinexu@163．corn) [ABSTRACT] AIM：Toexplorethepossibilitythathtestarvationenvironmentinducesautophagyofnucleuspul- posusceHs．METHODS：Primaryratnucleuspulposuscellswasculturedandstainedwihttohidineblue，Aleianblueand immunocytochemistryfortypeIIcollagen．Theculturedcellsweredividedinto4groups：controlgroup，3一methyladenine (3一MA)+DMEMgroup，3一MA+EBSSgroupandEBSSgroup．Thecellsweredetectdeofrautophayusingmonodansyl— cadaverine(MDC)staining，electronmicroscopynadWesternblotting．Athtesametime，hteinhibitoryratenadapoptotic rateofthecellsweredetectde byCellCountingKit一8(CCK一8)assayandTUNELstaining，respectively．瑚陷ULTS： Comparedwithcontrolgroup，theautophagosomeswere observedinnucleuspulposuscellsunderelec