重组质粒pcDNA3-β-NGF的构建及其转染小鼠骨髓间充质干细胞生物学活性的研究.pdfVIP

· 2082 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013，29(11)：2082—2087 [文章编号] 1000—4718(2013)11—2082—06 · 短篇论著 · 重组质粒 pcDNA3-13一NGF的构建及其转染 小鼠骨髓间充质干细胞生物学活性的研究木 毕 涌 ．一， 洪 娟 ， 李力群 ， 李晓莉 ，魏 鹏 ， 施镇江 ， 王廷华 ， 张 旭 (温州医科大学 神经生物学重点学科 ，附属第一医院神经内科，浙江温州 325000； 昆明医学院神经科学研究所，云南 昆明650031) [摘 要] 目的：构建人神经生长因子 31亚基 (3-NGF)真核表达载体 ，转染荧光小鼠骨髓间充质干细胞 (MSCs)并研究其生物学活性。方法：全骨髓贴壁培养法分离、培养和纯化荧光小鼠MSCs，构建真核表达载体pcD— NA3一B—NGF，并转染 MSCs；免疫组织化学染色检测 31-NGF的表达，观察 3-NGF阳性的MSCs对小 鼠海马神经元生 长的作用。结果：荧光小鼠MSCs可发出明亮的绿色荧光，且荧光不随培养时间延长和传代次数增加而衰减。重 组质粒pcDNA3一B．NGF转染MSCs后 3-NGF阳性率为 (37．12±2．14)％，高于 MSCs组 [(2．36±0．62)％]和空白 对照组 [(1．43±0．76)％]，差异有统计学意义 (P0．05)。pcDNA3—13N·GF转染MSCs上清液培养的新生小鼠海 马神经元 的突起长度 [(31±3) m]较 pcDNA3转染 MSCs组 [(23±4) m]明显增加，差异有统计学意义 (P0．05)，表明 ．NGF基因转染MSCs培养上清液中的产物能促进小鼠海马神经元的突起生长，具有明显的生物 学活性。结论 ：成功构建了peDNA3．B—NGF真核表达载体，其转染的荧光小鼠MSCs能正确 、稳定表达和分泌有生 物学活性的8一NGF。 [关键词】 神经生长因子；间充质干细胞；基因转染 [中图分类号] R741．05；R329．28 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2013．11．030 Biologicalcharacteristicsofbonemarrow mesenchymalstem cellsfrom GFPtransgenicmicetransfectedwithhuman13-nervegrowthfactorgene BIYong ，HONG Juan ，LILi．qun ，LIXiao．1i一，WEIPeng。 SHIZhen-jiang。， ， WANG Ting—hua ．ZHANGXuI， (DepartmentofNeurobiology，Department ofNeurology，theFirstA~liatedHospital，WenzhouMedicalUniversity， Wenzhou325000，China；InstituteofNeuroscience，KunmingMedicalCollege，Kunming650031，China．E—mail：drzhan— gxu@live．cn) [ABSTRACT] AIM：ToinvestigatethechangesofbiologicalcharacteristicsofGFPtransgenicmo