周期蛋白D1在蛋白激酶C调控哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用.pdfVIP

· 2214· 生髫痘堡生理杂志 chineseJournalofPathophysiology 2008，24(11)：2214—2119 [文章编号] 1000—4718(2008)11—2214—06 周期蛋 白D1在蛋白激酶 C调控哮喘大鼠 气道平滑肌细胞增殖中的作用术 乔礼芬， 徐永健 ， 刘先胜， 谢俊刚， 杜春玲， 张 建， 倪 望， 陈仕新 (华中科技大学附属同济医院呼吸内科 ，湖北 武汉430030) [摘 要] 目的：观察蛋白激酶C(PKC)激活后哮喘大鼠气道平滑肌细胞 (ASMCs)周期蛋白DI(cyclinD1) 的表达变化及两者表达相关性，探讨cyclinD1在PKC调控哮喘大鼠ASMCs增殖中所起的作用。方法：卵清蛋白 (OVA)吸入制备sD大鼠2周哮喘模型，原代培养ASMCs。采用正常大鼠(N组)和模型大鼠(A组)第3—6代细 胞，分别应用PKC特异性激活剂 12一肉豆蔻酰一13一乙酸佛波酯(PMA)及抑制剂 R0—31—8220干预 ASMCs，根 据不同处理分为4组：(1)空白组；(2)10nmol／LPMA组 ；(3)10nmolfLPMA+5I~mol／LRo一31—8220组；(4)5 I~mol／LRo一31—8220组。采用流式细胞术，四甲基偶氮唑盐(Mar)法，增殖细胞核抗原 (PCNA)染色等方法观察 药物对ASMCs增殖的影响。RT—PCR方法检测PKC—ot和cyclinD1mRNA表达水平，Westernblotting方法检测 PKC—ot和cyclinD1蛋白表达水平。线性相关分析评价PKC一 和cyclinD1表达水平的关系。结果：(1)在哮喘 组，与空白对照比较，PMA组、Ro一31—8220组 s+G／M期 比例、吸光度A值 、PCNA阳性表达率 ，差异显著(P 0．01)。在正常组，与空白对照相比，PMA组、R0—31—8220组S+G／M期 匕例、吸光度A值、PCNA阳性表达率差 异均显著(P0．01)。(2)哮喘组内PMA组、Ro一31—8220组PKC— 以及cyclinD1mRNA和蛋白表达水平与空 白对照比较，差异显著(P0．01)。正常组和哮喘组变化趋势一致。(3)在mRNA水平，大鼠ASMCsPKC—ot和 cyclinDI的表达呈明显正相关 (r=0．476，P0．05)，在蛋白水平两者的表达亦呈明显正相关 (r=0．899，P 0．01)。结论：PKC—ot能促进正常大鼠和哮喘大鼠ASMCs增殖 ，其在基因和蛋白的表达水平与cyclinD1的表达 呈正相关，提示PKC—ot可能通过调节cyclinDI而影响ASMCs的增殖。 [关键词] 哮喘；蛋白激酶C；细胞周期蛋白D1；气道平滑肌细胞 [中图分类号] R562．25 [文献标识码】 A Roleofcyclin DlinPKC regulatingtheproliferation ofairway smooth musclecellsinasthmaticrat QIAOLi—fen，XUYong—jian，LIUXian—sheng，XIEJun—gang，DUChun—ling， ZHANGJian．NIWang．CHENShi—xin (DepartmentofRespiratoryMedciine， ， HospitalAffiliatedtoTong~iMedcialCollege，HuazhongUniversityofScience andTechnology，Wuhan430030，China．E—mail：yjxu@tjh．tjmu．edu．ca) [ABSTRACT] AIM：ToobservetheexpressionofcyclinD1followingPKCactivationandthecorrelationbetween PKC— andcyclinD1inasthmaticratairwaysmoothmusclecells(ASMCs)，andtodiscusstheeffectsofcyclinD1on theproliferationofairwaysmoothmuscl