肝硬化门静脉高压症病人肠系膜微动脉收缩反应变化及RhoA%2fROCK通路的研究.pdfVIP

研究对象为2010年1月至2011年6月因乙肝后肝硬化PHT或非PHT病人因其它良性疾病在上 海交通大学医学院附属仁济医院普外科或肝移植科行手术治疗的病人。非PHT组：共8例，其中4例胆 总管结石，4例胆总管囊肿，行胆管一空肠Roux—en—Y吻合，男性5例，女性3例，年龄30一58岁，中位年 龄42．3岁，术前一般状况良好，2周未使用任何药物，术前肝功能和其它脏器功能均正常，术前cT或 例，均为乙肝后肝硬化PHT病人，无其它心血管系统、肺、脑等重要脏器合并症，有呕血或黑便史，胃镜和 螺旋cT血管成像(CTA)显示肝硬化，食管、胃底静脉曲张，需择期行断流术或断流+分流术或肝移植 肝炎病毒药物外，未服其它药物。 } 1．2术中门静脉压力的测定 病人行气静麻醉，术中禁用血管活性药物，血管标本取出前补液用平衡液。术中心率控制60-100次 ／分，平均血压控制80～100mmHg，氧饱和度控制98％以上。术中定期检测病人动脉血气，力保各项指标 均在正常范围内。术中选择直径0．3cm硅胶管，从横结肠系膜前叶的结肠中静脉右支经肠系膜上静脉插 管至门静脉(约15cm长)并固定，末端连接换能器，由多功能监测仪直接读取自由门静脉(freepondhy- 后，取出硅胶管，缝扎止血闭。 1．3血管获取： 测定门静脉压力后，距离十二指肠悬韧带约1m处取空肠旁第三级肠系膜血管及其系膜，并保证不 169 o ∥ 影响空肠局部血供(过去研究已证实此方法可行性，不会引起肠缺血性坏死)(图1)；平衡液冲洗清除血 肠系膜动脉后置于液氮内用于分子生物学学测定。 1．4单根血管灌流系统的建立 得到第三级肠系膜微动脉。 将分离得到的肠系膜微动脉转移到含有MOPS—PSS液的单根血管灌流槽的血管槽内，在解剖显微 镜下，将玻璃微管插人微动脉管腔的一端，用11-0单股线结扎固定，以8mmHg的灌注压冲洗出血管腔 内的血液，并维持血管另一端的开放。然后，将另一玻璃微管插入血管管腔的另一端，同样以lI-0线结 扎固定。 肠系膜微动脉预收缩：插管结束后，血管在80mmHg的管内压下，稳定30min，通过显微镜与计算机 记录基础状态的直径，然后以去甲肾上腺素(10-Smol／L)预收缩至少2次，在2次收缩差异小于10％后， 进行下列实验f3f。 ¨。．I¨国际肝胆胰外科昆山论坛论文汇鳙 1．5．肠系膜微动脉对去甲肾上腺素反应性的测定 根据上述方法，待血管稳定后，按累积浓度法向浴槽中依次加入去甲肾上腺素(10{一10。5M)，分别记 录不同去甲肾上腺素浓度下血管的收缩性，以血管内径改变量(斗m)占血管最大直径(肛m)的百分比为 量化标准，绘制去甲肾上腺素的量一效曲线。以血管收缩率作为纵坐标，以去甲肾上腺素浓度的常用对 数值作为横坐标，对比剂量反应曲线的组问区别以及当收缩率达到50％时所需要去甲肾上腺素的浓度 (EC弼)。 1．6免疫印迹法(Western—blot) 酸化，通过特异性的抗体能检出，来反应ROCK活性是否改变|451。 2结果： 2．1术中门静脉压力的测定结果 o 静脉压力平均为(13．7±2．0)mmHg(n=6)，两者统计学比较有显著差异(P0．01 2．2非PHT和肝硬化PHT病人肠系膜微动脉对去甲肾上腺素反应性的变化 心o．f¨国际肝胆胰外科昆山论坛论文汇编 与非PHT病人相比较，肝硬化PHT病人的离体肠系膜微动脉对去甲肾上腺素剂量反应曲线右移 (图5)，EC蜘增大(图6)，表明PHT病人的肠系膜动脉对去甲肾上腺素的敏感程度降低(P0．01o 2．3非PHT和肝硬化PHT病人肠系膜动脉蛋白量的变化 moesin和p-moesin蛋白量的变化(图7)。