小叶黑柴胡总黄酮干预ANIT所致大鼠急性黄疸型肝损伤的尿液代谢组学初步研究.pdfVIP

代谢组学是通过考察生物体系在不同状态下(如某个特定的基因变异或环境变化)，代谢产物图谱及其 动态变化来研究生物体系代谢网络的--f2科学nJ引．代谢组学的核心思想是，以整体论方法研究生物体系中 的构件分子族之间，以及机体与环境之间的相互作用网络．近年来，国内外学者利用代谢组学方法对传统 中药的作用机制进行了探索性研究，为中药现代化研究提供了一些有益思路．小叶黑柴胡(Bupleurum et smithiiWolff Shan var．parvifolium 称“野槐子根”，主产于青海、甘肃、宁夏、内蒙古等地．周伟等b3对小叶黑柴胡地上茎叶部分的活性成分 研究发现，‘其以黄酮类化合物为主，詹雪晶等H1发现，该类化合物有显著的退黄利胆功效，显示其具有很 好的临床应用前景，但是其作用机制未见深入探讨．本文采用常规血清生化指标分析，观察小叶黑柴胡总 黄酮对ANIT所致大鼠急性黄疸型肝损伤的防治效果，采用基于超高压液相色谱一串连四级杆一飞行时间质 performancechromatography—quadrupoletime—of-flight 谱(Ultra—high liquid least 行检测，通过正交一偏最d,--乘法(Orthogonnal—partialsquares，O-PLS)分析尿样代谢谱差异， 寻找可能的生物标记物，为揭示其作用机制提供理论依据． 1材料与方法 1．1材料 Aesar 小叶黑柴胡总黄酮提取物，由中国人民解放军中药研究所药物制剂实验室提供．ANIT购自hlfa 公司，橄榄油购自国药集团化学试剂有限公司，乙腈购自Fisher公司，甲酸购自北京化工厂，谷丙转氨 酶(Alanine aminotransferase，ALT)试剂盒、谷草转氨酶(Aspartate 盒、总胆红素(Total bilirubin，TBIL)试剂盒、直接胆红素(Direct 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司产品． 1290 主要设备为AgilentInfinity超高压液相色谱系统，Agilent6540四级杆一飞行时间质谱仪， BSl20全自动生化仪，Anke Q)，KQ一500B 型超声波清洗器等． 饲料和饮用水． 1．2动物分组及给药 大鼠适应3d后，随机分成空白组、模型组和总黄酮给药组，每组5只．小叶黑柴胡总黄酮以蒸馏水 溶解，加0．1％吐温80超声助溶．根据文献H。调整小叶黑柴胡总黄酮用药剂量为29／kg．给药组大鼠按 后，模型组和治疗组动物按75mg／kgANIT橄榄油溶液进行灌胃，空白组给予同等剂量的橄榄油溶液，造模 后按原剂量继续给药． 1．3样品采集及处理 给药后将大鼠放入代谢笼，收集8h内尿液，置于一20。C冰箱保存．第6d收集尿液后于股动脉取血并 处死大鼠． 血液样品室温静置lh，3600r／min离心10 11 11 min，收集上清．取100L血清，加入400L生理盐 11 水稀释．全自动生化仪测定血清DBIL、TBIL、ALT、AST值．室温解冻尿液样品，取100L尿液，加入400 uL乙腈稀释，涡旋30S，4C静置30min，l 11 4000r／min离心15min，取上清，经0．22m尼龙膜过滤， 供UPLC—Q—TOF／MS进样分析． 1．4 UPLC—Q-ToF／骼数据采集 色谱柱为ZORBAXRRttD 式，毛细管电压正离子扫描3 气为氮气，碎裂电压130V，碰撞室压力35psi，质量扫描范围m／z100’1000． 1．5数据处理与分析 1．5．1采用SPSS 1