血竭素高氯酸盐对鸡胚成纤维细胞增殖与胶原合成影响.pdfVIP

中国畜牧兽医学会中兽医学分会2011年学术年会论文集 血竭素高氯酸盐对鸡胚成纤维细胞增殖及胶原合成的影响 贾召锋，陆子音，于文会’ (东北农业大学中兽医教研室，黑龙江哈尔滨150030) 创伤是兽医临床常见的一种外科疾病，创伤愈合是一个复杂的生物学反应过程，涉及炎性反应、各 种细胞迁移和增殖、创面组织重塑等过程。成纤维细胞在创口愈合中发挥重要作用，是肉芽组织收缩、 创口有效闭合和瘢痕组织形成的主要参与者。传统兽医学治疗创伤的主要方法是利用活血化瘀、止血类 中药进行治疗。本研究旨在探讨止血药血竭中血竭素对鸡胚成纤维细胞增殖和胶原合成的作用机制，为 开发新的外用防腐生肌类产品提供理论依据。 1材料 1．1试验药物 血竭素高氯酸盐，购自中国药物监察所。根据CEF的安全浓度测定结果，用无血清DMEM培养基 稀释成8个浓度(见结果各表)，各浓度培养基按常规量加入双抗、终浓度为5％的胎牛血清。 1．2试验仪器 T6新世纪型紫外可见分光光度计，购自北京普析通用仪器公司；流式细胞仪，购自美国BD公司； 550型酶标仪，购自Bio-Rad公司；HB050型倒置相差显微镜，购自Zeiss公司。 2试验方法 2．1CEF细胞培养及药物处理 的Dp，每种浓度4孔，重复4块培养板；对照组仅加无血清DMEM培养基：另设无细胞的空白调零 孔。继续培养CEF，分别在加药后12、24、48、72h时每组各取4孔测定CEF增殖情况。 2．2细胞增殖测定 继续培养，测定时快速吸除孔内培养液，每孔加入150pL裂解液，室温震荡10min，酶联免疫检测仪于 570nm处测定OD值。OD值与活细胞的增殖成正比，由此确定Dp对CEF活性干预的最佳浓度。 2．3细胞周期测定 次，70％冷乙醇固定，采用流式细胞仪分析各组细胞周期的变化。 2．4细胞胶原含量测定 浓度的Dp的无血清培养基继续培养。分别于24、48h后吸取上清液，按照羟脯氨酸试剂盒说明测定胶 原量，试验重复3次。 2．5MMPS／TIMPS测定 451 中国畜牧兽医学会中兽医学分会2011年学术年会论文集 作进行。 2．6统计方法 各组数据采用均数士标准差表示(fb)，统计学方法采用SPSS13．0统计软件包对数据进行分析， 各组之间进行单因素Duncan’S方差分析，分析各组间是否有统计学意义(P0．00。 3结果与分析 3．1Dp对CEF细胞增殖的影响 的IC50是8p∥L，药物干预最佳时间为48h。 表1Dp对CEF细胞增殖的浓度和时间效应 TablelConcentrationandtimeeffectofDPonCEF 3．2Dp对CEF细胞周期的影响 显著降低细胞凋亡率，而增高细胞存活率，与对照组比差异极显著，而48h时作用效果相反。 表2Dp对CEF细胞凋亡率的时间效应 Table2Timeeffectof onthecell rateofCEF Dp apoptosis 3．3Dp对CEF胶原代谢的影响 24h时显著促进胶原的合成，而48h时明显抑制CEF合成胶原蛋白，与对照组相比 Dp干预CEF 有生物统计学意义． 452 中国畜牧兽医学会中兽医学分会2011年学术年会论文集 表3Dp对CEF胶原代谢的时间效应 Table3Timeeffect Oil ofCEF ofDpeollagenicsynthesis 3．4Dp对CEF分泌MMPs及TIMPs的影响 根据表4可知，Dp干预CEF 达，从而造成MMP．2／TIMP．2、MMP．9／TIMP．1的比值明显升高，与对照组比差异极显著。 表4Dp对CEF表达MMPs及TIMPs的影响