免疫组化技术标准化探讨.pdfVIP

201 1年全国病理技术新进展研讨会论文汇编 对策：(1)将临床病理科从传统的经验管理模式向科学化管理模式转变，对各项技术及诊断 工作进行规范化管理，制定医师规范，技术员规范、病理诊断规范、病理会诊规范、各种病 理检查收费规范等；(2)学习浙江省临床病理质控中心三级质控管理网络模式(省级病理质 控中心、市级病理质控中心、各级医院病理质控小组)搭建成省病理质控工作开展的管理网 络。 陕西地区 177．免疫组化技术标准化的探讨 王文勇黄晓峰王映梅赵一岭马福成王伯j云 第四军医大学病理学与病理生理学教研室 【关键词】免疫组织化学；标准化；实验室认证 免疫组织化学技术由Coons首创于1950年，刘彦仿、王伯法等fl】于1965年在国内首先 建立了免疫组织化学技术。该技术经历了4个发展阶段：免疫组织化学各种方法不断建立和 发展阶段，推广普及阶段，用于临床病理诊断及广泛应用阶段，该技术标准化、规范化及质 量控制阶段。该技术具有很高的特异性、灵敏性、简便性，能将形态和功能代谢相结合，定 性、定位和定量相结合，基因水平和蛋白质水平检测相结合，细胞水平和超微结构水平相结 合。因此，免疫组织化学技术已广泛应用于生命科学和医学各个领域的研究和诊断中，已从 技术发展成为--f3新的学科【21。随着免疫组化各种方法的建立和运用，极大促进了该技术的 发展，并为免疫组化技术在病理学诊断中的迅速普及应用打下了坚实的基础。但随着国内免 疫组化技术日益广泛应用，更加认识到免疫组化技术标准化的必要性和紧迫性，免疫组化标 准化是保证结果可靠性、可重复性的重要前提【3J。我们认为免疫组化技术标准化主要体现在 以下几方面：免疫组化染色前技术的标准化(组织固定、取材、脱水、包埋的标准化)；组 织制片标准化；抗原修复标准化；对照实验正确设立；试剂标准化(抗体和检测系统标准化)； 免疫组化具体操作步骤的标准化；免疫组化染色结果判读标准化；医学实验室认证。 1免疫组化染色前技术的标准化 免疫组化要求组织离体后立即固定，理想取材厚度2toni，组织在脱水机中的处理条件 应十分妥当。大量的实验发现在加热抗原修复过程中造成组织脱片的主要原因是取材过厚固 定不佳以及脱水、浸蜡处理不当所致。如果HE染色做不出满意的染色结果，那么免疫组化 染色根本无法保证质量14J。 固定是保存组织原有形态结构，防止组织抗原弥散丢失、保存组织抗原性的关键，因此 离体组织必须立即固定。但这不是仅仅是病理科的工作，必须和手术送检科室进行配合，才 mim食道、胃肠、胆囊和膀胱等空 能做好固定标准化工作。离体组织固定尽量不要超过15 腔脏器需根据规范方法剪开后再固定：肝脏、脾脏等实质器官需由背面，沿长轴每隔2cnl 纵向平行剖开，切成数片再固定；微小组织和液体沉淀物需先用拭纸或滤纸包好后再固定； 免疫组化常用的固定液首选pH7．2的100ml／L中性福尔马林固定液(配方如下：409／L多聚 甲醛100ml，磷酸二氢纳0．44 m1)。固定液的量一般为 g，磷酸氢二钠2．58g，蒸馏水900 组织块总体积的5～10倍，使用标准的固定容器。 2组织制片标准化 1．1切片防脱片标准化处理防脱玻片的处理各实验室多采用不同的黏附剂，目前常用的是 34l 201 1年全国病理技术新进展研讨会论文汇编 不论是免疫组化还是原位杂交该黏附剂都具有极好的防脱片效剿一一】。 1．2切片标准化使用一次性切片刀，具有切片完整性好、刀痕较少、切片较薄、染色质量 高的优点。切片厚度应在35 gm，这样的切片免疫组化阳性结果定位清晰。切片过厚不仅 容易脱片，还影响免疫反应及镜下观察。组织切片后应在5660℃恒温箱烤2--3h防脱片 【4】。 3抗原修复标准化福尔马林固定组织导致组织中抗原决定簇封闭，也就是组织细胞经福尔 马林固定后，导致抗原决定簇的三维结构发生异常改变，使抗原决定簇被掩盖或原来位于表 面的一些抗原决定簇因折叠而形成隐蔽的抗原决定簇睁¨。因此抗原的的理化性质发生了显 著的变化，表位