黄芪多糖对孕早期蜕膜TLR4表达与功能的影响.pdfVIP

中国中医药科技2011年3月第 l8卷第2期 Mar．2011Vo1．18No．2 ·ll3- 黄芪多糖对孕早期蜕膜 TLR4表达与功能的影响 刘永林 张 丽 梁月琴 陈益民 张 蕾 陈 聪 姚轶敏 陈婷婷 (浙江省 中医院 ·杭州310006) 摘 要 目的：观察黄芪多糖通过孕早期蜕膜 TLR4途径对 IL一6、TNF— 分泌的影响。方法：采用流式 细胞术检测孕早期蜕膜TLR4的表达，并对孕早期蜕膜进行原代培养，将其分为两大组，PBS对照组、LPS 刺激组。用0、25、50、125、250mg／L黄芪多糖预处理两组蜕膜细胞 48小时，再分别用PBS、LPS处理 24小 时。采用酶联免疫吸附试验方法检测上清波TNF一理、IL一6的分泌，用流式细胞仪检测蜕膜细胞TLR4的 表达。结果：孕早期蜕膜功能性表达 TLR4，用LPS刺激细胞后，TLR4表达上调，IL一6、TNF一 的分泌显 著增加，用25、50、125、250mg／L黄芪多糖预处理蜕膜细胞48小时后，250mg／L黄芪多糖可以抑制TLR4 表达的上调．同时可以抑制 LPS刺激蜕膜细胞引起的TNF— 分泌增加，而 25、50、125mg／L黄芪多糖不 能抑制LPS刺激引起的TLR4表达的上调；但25,50、125、250mg／L黄芪多糖均可以引起 IL一6分泌的增 加。未经LPS刺激，用25、50、125、250mg／L黄芪多糖作用蜕膜细胞 ，蜕膜TLR4的表达及 IL一6、TNF—d 的分泌则无显著性变化。结论：TLR功能性表达于孕早期蜕膜；黄芪多糖可以通过改变蜕膜 TLR介导的 免疫功能影响母胎界面免疫微环境。 主题词 黄芪多糖／药理学 孕早期蜕膜 ／药物作用 体外研究 母胎界面复杂的细胞因子网络对妊娠维持至关重要，其 EDTA：杭州吉诺生物医学技术有限公司；胶原酶：Sigma；PE 中IL一6(白介素一6)主要来源于蜕膜细胞，Sehafer”认为 — anti～TLR4及 同型对照 PE—anti—IgG2a：ebioscience公 IL一6的高表达参与激活母胎界面早期蜕膜反应及妊娠维 司；鼠抗人胎盘泌乳素单克隆抗体、SABC免疫组化试剂盒： 持。另一方面母胎界面局部高水平的TNF— (肿瘤坏死因 博士德公司；LPS：美国Invivogen公司；TNF一0【ELISA试剂 子 理)可能通过多种途径导致流产；促进滋养细胞凋亡；提高 盒 ：AxygenFermentas；IL一6ELISA试剂盒 AxygenFermentas。 前列腺素E 合成 ，兴奋子宫平滑肌；激发Th。型免疫反应， 1．3 方 法 排斥胚胎组织；激活凝血系统 ，使胎盘滋养血管血栓形成 1．3．1 蜕膜细胞原代培养 取人工流产早孕蜕膜组织剪成 等 j。黄芪是临床应用广泛的中药之一，具有扶正固本、 糊状，加入双倍体积的0．1％胶原酶，37E消化30分钟，加入 健脾益气功效，作为中医治疗气虚型流产的主药之一，具有 含20％胎牛血清的DMEM培养液终止消化。洗涤，用200 明显的疗效。黄芪多糖是其有效活性成分 ，研究发现 。黄 目滤网过滤，收集细胞 ，加入 0．84％NHCMml，4~C冰箱 内放 芪多糖能抑制心脏微血管内皮细胞 NF—KB的核转位，降低 置 10分钟破除多余红细胞，洗涤，用DMEM调整细胞浓度， 炎症相关因子如 T-NF— 的激活；也可以促进 IL一6的分 用PI染色，FCM观察细胞活力，5．0x10个细胞接种于培养 泌，但黄芪多糖这种作用机制仍然不明确。TLR4(Toll样受 瓶中，每48小时换液，细胞融合后 ，用胰蛋白酶 +EDTA消 体 一仅)是～种 I型跨膜受体，可以介导分泌 TNF—Of．、IL一 化传代。将传代蜕膜细胞接种到放置经多聚赖氨酸包被过 6。本课题组前期已证实蜕膜功能性表达 TLR4，本文观察了 的装有盖玻片的6孔培养板中，贴壁后换液继续培养，待细 黄芪多糖对蜕膜细胞TLR表达及其介导的TNF—d、IL一6 胞长成单层后取 出盖玻片，用