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410 华东地区第十二届实验动物科学学术交流会
1材料与方法
1．1试剂
为分析纯。
1．2实验动物
6月龄成年斑马鱼(野生型，AB品系)。体长约为3-4cm。饲养在经活性炭过滤并充分曝气的水体中，
黑暗周期(h)14／10。每天喂食2次经紫外线消毒的卤虫无节幼体(Artemia
ssp．naupli)。
1．3染毒实验
将月龄6个且的成年斑马鱼置于装有水回流装置的鱼缸内(容积50L)先饲养2周，观察每周一次的
la la
组：饲养清水中含1250
g／L的DBP：(4)DBP低剂量组：饲养清水中含625g／L的DBP。连续染毒DBP
30天，在染毒期间实验斑马鱼未出现死亡，无明显活动异常和疾病发生。染毒结束后，将各处理组的雌雄
鱼转移至清水中混合自然交配。
1．4亲代(Fo)鱼卵收集及孵化
在产卵前15小时，把各组雌雄鱼移至同一鱼缸中，以3：3(早／古)为一缸，鱼缸底部放置一层玻璃隔
栅，以避免亲鱼吞食鱼卵。斑马鱼为光周期产卵(14d时光照／lOd、时黑暗)，排卵发生在光照后数分钟内；
用一块挡板将雌雄鱼隔开直至次晨8时，抽出挡板，在强光下，雌雄斑马鱼混合自然产卵。交配30min)舌，
可收集到沉在产卵鱼缸底部的鱼卵，并在解剖镜下挑出受精鱼卵计算其受精率。用蒸馏水迅速清洗鱼卵以
NaCl，1．0mmol／LKCl，1．7mmol／LHEPES，2．4mm·31／L
除去残留物，放入盛有胚胎培养液(#38．7mmol／L
CaCl2)的充氧饱和培养皿中，置于28-4-1℃温箱孵化。计算鱼卵数、受精率以及72d时孵化率。
1．5F1代斑马鱼交配产卵实验
各处理组的亲代斑马鱼交配，产卵，孵化出的Fl代鱼均在清水中饲养至180dph。各组随机选9对斑马
鱼进行F，代繁殖实验，按1．4中所述方法收集F1代斑马鱼的鱼卵，计算鱼卵数、受精率，以及72d时孵化率，
来衡量F1代繁殖能力。交配后，所有鱼被放回原来的鱼缸内饲养，7天后进行下次交配实验，共重复2次。
1．6 F1代雌，雄斑马鱼置换交配实验
为了进一步研究DBP染毒对F1代斑马鱼雌雄不同性别生殖能力的影响，设计了置换交配实验。从每个
鱼。
1．7性腺组织学检查
(Davidson’S
1．8RT-PCR、狈IJ定VTG表达
5min，42。C
总RNA。引物根据文献鹏’9]手艮道设计(表1)。使用lugRNA模版进行逆转录。RT参数设置为70。C
60min，94。C imin，
c[条
带亮度的比值作半定量。
华东地区第十二届实验动物科学学术交流会411
表l引物序列
1．9统计分析
使用SPSS
2结果
2．1对Fo代斑马鱼生殖能力的影响
1．t
本研究采用每缸产卵数、受精率矛[J72h孵化率来评估斑马鱼的生殖能力。由表2可知，625
g／L染毒的
g／LDBP
处理组斑马鱼每缸产卵量和72h孵化率显著低于空白对照纽和丙酮对照组(P0．01，单向ANOVA)。
表2DBP对Fo代斑马鱼产卵量、受精率和72h卵化率的影响
注：料P0．0l
2．2F1代斑马鱼生殖能力的影响
由图1可见，F，代交配产卵实验中，空白对照组在一次交配后平：均每缸可
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