超高效液相色谱―串联质谱测定土壤中磺胺类药物残留.docVIP

超高效液相色谱―串联质谱测定土壤中磺胺类药物残留 [摘 要] 建立了固相萃取-超高效液相色谱三重四级杆质谱联用法测定土壤中痕量的18种磺胺类残留的方法，土样提取液经过固相萃取富集净化后由液相色谱分离、三重四级杆质谱检测。该方法在10 min内完成对18种目标化合物的分析。磺胺类线性范围为1～100?g/L，相关系数均大于0.995，6次空白加标重复测定的相对标准偏差（n 6）为1.8%～15.9%。l8种目标化合物的方法检出限在0.05～0.48 ?g/kg之间，实际样品的加标回收率为64.9%～104%。该方法操作简便，重现性好，可用于土壤中磺胺类的检测。 [关键词] 磺胺类；液质联用；固相萃取 中图分类号：O657 文献标识码：B 文章编号：2055-5200（2014）02-051-07 磺胺类（sulifonamides，SAS）药物为广谱抑菌药，因其具有抗菌谱广、高效、低毒、价格低廉等特点，在畜牧、水产等养殖生产中广泛使用[1-9]。磺胺类药物用于预防和治疗细菌性感染疾病[8，10-13]，但过量使用有可能在人体内蓄积，蓄积浓度超过一定值时对人体有害，并导致病原体产生耐药性[7，10，14-16]。与其它常用抗生素相比，这些药物性质更加稳定，但其在动物源性食品中的残留可通过食物链对人体健康构成危害[4，9，11]。 抗生素摄入后大部分以原药和代谢产物形式随粪尿排出体外，成为新的环境污染物，并以多种途径进入河水、地表水甚至饮用水及土壤中[6，12，17]。有调查表明，磺胺药物在人体中长期存在会导致许多细菌对其产生抗药性，且有潜在的致癌性，已被多个国家规定限量或禁止使用[18-19]。 SAS药物及其代谢物的检测方法主要有高效液相色谱法（HPLC）和高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS） [4，7-9，18]。HPLC的灵敏度较低且无法提供结构信息，一般作为筛选方法；HPLC-MS/MS灵敏度高，选择性和特异性好，抗干扰能力强，能够对目标化合物含量较低的样品进行很好的定性确认，是目前较为先进和常用的动物源性食品中药物残留检测方法。液质联用法由于其较高的灵敏度被广泛应用于环境中抗生素类药物的检测[8-10，19-20]。本文采用了固相萃取超高效液相色谱三重四级杆质谱联用法测定18种磺胺类抗生素，优化了前处理条件和分离检测条件，并应用于实际土样、污泥的分析，该方法具有操作简单、试剂少、分离速度快、灵敏度高、定量准确、线性范围宽，等优点[21-25]。 1 实验部分 1.1 主要仪器与试剂 ACQUITY UPLC XevoTM TQ MS 超高效液相色谱仪串联质谱仪（美国Waters公司）； 固相萃取仪（美国Supelco公司）；离心机（Sigma公司），超声波清洗器（美国Cole―Parmer公司），Oasis HLB固相萃取柱（6mL/500 mg，Waters公司）。甲醇、乙腈（色谱纯，Fisher Scientific），甲酸（纯度为99%，Acros Organics），氨水、盐酸（优级纯，北京化学试剂公司）；实验室用水均为超纯水，电阻率l8.2 MQ?cm（Millipore超纯水机制备）。18种磺胺类购自Dr.Ehrenstorfer公司（Augsburg，Germany），纯度均高于97%。 1.2 标准溶液配制 以甲醇为溶剂，分别配置质量浓度为1000mg/L的标准储备液，于-18℃保存。临用时用0.1%甲酸水溶液稀释上述标准储备液，配制成不同浓度的标准工作液。 1.3 样品采集 土壤样品于2013年3月采自宁波，将不同土壤污泥样品分别风干后，研磨混匀，转移至密闭玻璃瓶中-20℃保存。 1.4 样品前处理 1.4.1 提取 称取10g样品于50mL离心管中，用乙腈+水+2%甲酸（49+49+2，v/v/v）20mL超声提取10min，振荡10min，4℃离心10min（9500 r/min），将上清液转入50mL容量瓶中，重复上述步骤，合并提取液，定容。分取25mL，氮气条件下35℃水浴吹去大部分乙腈，剩余提取液待过柱。 1.4.2 净化 依此用6mL甲醇和6mL水条件化小柱，将上述提取液上样，再用5mL水淋洗，真空抽干10min后，用10mL甲醇洗脱收集，氮气条件下35℃水浴吹干，1mL甲醇定容，过0.22?m滤头，待上样。 1.5 LC-MS/MS测定条件 1.5.1 色谱条件 色谱柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×100mm，1.7?m；进样量：5?L；柱温：30℃；梯度洗脱及流动相参数设置如表1： 表1 淋洗溶剂及参数设置 时间/min 流速/ml/min 0.1%甲酸水溶液+10mmol/L乙酸铵 甲醇/% 0 0.3 90 10 1.0 0.3 90 10 2.5