西农萨能奶山羊TFSP1基因CDS区的克隆及其腺病毒穿梭载体的构建.pdfVIP

326 02011年学术年会 T020065 西农萨能奶山羊TFSPI基因CDS区的克隆及腺病毒穿梭载体的构建 朱江江 罗 军 孙雨婷林先滋 李君石恒波李芳 宋美艳 00) (陕西省农业分子生物学重点实验室，西北农林科技大学动物科技学院，陕西杨凌7121 引言 TFSpl(specificityprotein1)作为Sp／KLF蛋白家族成员之一，是最早被发现的转录因子，可通过 基因启动子．卜．均有TFSPl的结合位点，并可上调FASN的表达。Brian 用。但目前尚无关于TFSPl基凶调控LIJ羊脂肪酸代谢的研究报道。本实验克隆了奶山羊陋铲J基因，构 建了TFSPI腺病毒穿梭线体，为进一步进行腺病毒载体的重组与包装，并研究其在山羊原代乳腺卜皮细 胞中的功能奠定基础。 材料方法 基因序列进行同源性比对，参考其保守区域设计并合成引物。以两北农林科技人学萨能羊原种场健康的 鉴定和测序。 结果 功连接腺病毒穿梭载体。 讨论 Lu 研究表明，陋S尸』能特异性的识别GC盒，可见TFSPl在脂肪酸代谢中亦发挥重要的作用。Suying 基因的CDS区与其他哺乳动物问存在高度同源性，与牛、鼠和人的TFSPl基囚相比，其核苷酸相似性在 90％以上，氨基酸相似性在95％以上。本实验中使用AdEasy腺病毒过表达系统，首先需要构建包含有 目的基因的腺病毒穿梭载体，并与腺病毒骨架载体I’日J进行同源重组后方可进行腺病毒的包装与扩增， EGFP绿色荧光蛋白基因，便于对包装过程的观察，有利于试验的顺利实施。 参考文献(略)